实验一血清蛋白质测定范玉平2.pptVIP

方法学介绍 蛋白质测定方法很多，常用的有： 化学法 物理法 染料结合法等 一.化学法 １．凯氏定氮法：用于测定生物物质中总氮含量的方法，其准确度高、精密度好，成为测定蛋白质的最经典的标准方法，但由于其测定手续繁琐，操作复杂，费时，除用作血清蛋白质标准品定值及参考性测定工作外，现已很少在血清总蛋白测定中使用，不适合血清TP的常规测定。 一.化学法 ２．酚试剂法：灵敏度较高，可用于测定脑脊液和尿液中的微量蛋白质，但由于该法是先测定出酪氨酸的量，再根据酪氨酸在蛋白质中含量而得出蛋白质的含量，因而准确度较差。 一.化学法 ３．双缩脲法：测定蛋白质最古老的方法之一，此反应的优点是对白、球蛋白产生的颜色反应相近，干扰物质小，且不受温度影响，唯一的缺点是灵敏度较低，比酚试剂法低约100倍。但本法的检出限为0.2～1.7g/L，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要，成为临床实验室血清TP首选的最方便，实用的常规方法。 二 物理法： 又可分为紫外吸收法、折射法和重量法等。除紫外吸收法外，其他方法现已很少使用或被淘汰。 三 蛋白质与染料结合的方法 是比较灵敏而特异的一类方法。用的较多的染料有丽春红、考马斯亮蓝G250和邻苯三酚红钼。丽春红蛋白结合法测得的结果与凯氏定氮法相符，并且显色后在室温可稳定24小时；考马斯亮蓝G250结合