HPLC中常用的检测器.pptVIP

一:目前HPLC中常用的检测器 检测器是一套分离分析设备的关键. 目前有两种基本类型的检测器: 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。 另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，蒸发光散射，电导检测器等。 1:紫外-可见光（UV-VIS）检测器 工作原理： 基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比 A=lg Io/I=εbc ????其中A为吸光度（消光值）,Io为入射光强，I为透射光强，ε为样品的吸光度（消光系数）b为光程长，c为样品浓度。 通用型检测器 约有80％的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检测。 优点: a: 灵敏度高，检测下限约为 10-6 g／ml b: 线性范围广 C: 对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱 限制: a: 没有紫外吸收的物质不能检测 b: 应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相 (限制了一些一些截止波长在200~300nm之间的良好溶剂的使用 ) 2:荧光检测器 原理: 物质的分子或原子经光照射后，有些电子被激发至较高的能 级，这些电子从高能级 跃至低能级时，物质会发出比入射光 波长较 长的光，这种光称为荧光。荧光检测器就是在样品的激发波长处检测发射光的强弱. 在样品浓度足够低时,下，荧光强度与如射光强度,量子效率及样品浓度成线形关系。 荧光强度: F=I0 εφ L C 荧光检测器是一种选择性检测器 不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物如喹诺酮类药物采用这种检测方法. 优点: a: 灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高 )，其检出限可达10-9g/ml，(比紫外检测器高2—3个数量级，适合于痕量分析 ) b: 可以用于梯度洗脱 c: 对仪器的稳定性（如温度和压力的稳定性）依赖较小 d: 选择性好，优于紫外 例子：花生酱提取物中衡量黄曲霉素的荧光检测法 缺点: a:适用范围有一定的局限性 –只适用于有荧光基团＆衍生化之后有荧光基团的化合物 b: 定量分析时线性范围较窄 它适合于 稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋 白质等荧光物质的测定 3:二极管阵列检测器（diode-array detector, DAD） 原理: 光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的UV-VIS检测器。它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。 　１９７６年Ｎilano等人首先报道这种检测器，它不必停留就可获得“在流”色谱的全部光谱信息，可跟随色谱峰扫描，用来观察色谱柱流出组分的每个瞬间的动态光谱吸收图． 　　由于比其他快速扫描检测器具有结构简单，工作可靠，性能好的优点，自一问世，就得到迅速发展． 结构： 　　核心是二极管阵列元件，它由一系列光敏二极管蚀刻在硅片上组成．一般，每个阵列又２００～１０２４个光电二极管组成，他们的光敏范围是２００～６００nm，每只二极管的分辨率是１～２nm，光电二极管越多，分辨率越高． 　　阵列的每一单元有一只光敏二极管和一只与之并联的电容器． 　　光电二极管紫外检测器n个单元同时检测，从而使采样时间减少到普通的１／Ｎ．使用２１１个二极管的阵列元件，最快时，每１０ms可完成一次测量．每秒中可以收集２００００～１０００００个数据． 与普通UV-VIS检测器不同之处: a: 普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池。 而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检测. b:普通UV-VIS检测器只能得到二维的谱图,而DAD可以得到三维图谱. 应用 a: 色谱峰纯度检查 　　　　　比较光谱法 　　　　　吸收比法 　　　　　双波长法 b: 色谱峰鉴定 与标准品或标准光谱比较 正常紫外光谱的比较 三维色谱能提供更多全面的信息。 4:电化学检测器 理论基础 a: 法拉第第一定律 在电介过程中，电极上起反应的物质量 （W）与通过电介池的电量（Q）成正比。 b: 法拉第第二定律 各种不同的电介质溶液中，通过相同的电量 时，电