感染性克隆的发展及应用—培训课件.pptVIP

开发载体疫苗 Sindbis SFV Kunjin NDV CSFV * * * * * * 研究方案 PRV鄂A株 含全长PRV基因组感染性的BAC载体（pPEa）的构建 通过直接连接克隆基因 的pPEal载体的构建 接合介导的通用 整合克隆系统的构建 利用同源重组的通用 整合克隆系统的构建 PI-PspI I-SceI 插入pPEa的某一位点 EcoRI PacI 插入pPEa的某一位点 供体 质粒 受体 质粒 受体 菌株 质粒的构建 宿主菌株的改造 利用这三套系统分别克隆本实验室有的病原微生物的免疫原性基因6~8个，检测其有效性 将这三种方法组合，构建能表达多个基因的载体，并对载体扩容 表达研究 多价苗 基因剂量效应 拟病毒 最终目标： 将PrV的感染性克隆改造成可以随意、高通量插入的载体系统，使重组病毒的构建更快速、更便捷。 RNA病毒感染性克隆 1978年，Taniguchi首次发现将包含RNA噬菌体Qβ基因组全长 cDNA的质粒导入细菌后具有感染性——感染性克隆（Nature, 1978) 1981年，Racaniello等通过脊髓灰质炎病毒全长cDNA获得了动物病毒的感染性克隆，实现了正链RNA病毒的感染性克隆(Science, 1981) 1989年，Luytjes等建立了流感病毒的感染性克隆操作系统，开创了分节段的负链RNA病毒感染性克隆的研究（Cell, 1