单纯疱疹病毒论文：的携带HSV-2 gB CTL表位的gD抗原制备及其免疫效果评估.doc

单纯疱疹病毒论文：携带HSV-2 gB CTL表位的gD抗原制备及其免疫效果评估 【中文摘要】单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus 2, HSV-2)为双链DNA病毒,属疱疹病毒科,感染可引起生殖器疱疹。HSV-2感染在全球普遍存在,发展中国家的形势更为严峻。HSV-2还可增加艾滋病和宫颈癌的感染机率。疫苗在预防和治疗HSV-2感染和复发中具有重要的作用。目前的疫苗研制工作主要集中在HSV-2糖蛋白上。HSV-2表面的11种糖蛋白是其主要免疫原,其中的糖蛋白D(glycoprotein D, gD)和糖蛋白B(glycoprotein B, gB)是亚单位疫苗研究的热点。gD具有高同源性和保守性,是HSV-2最主要的保护性抗原。gB可诱导产生中和抗体并能诱发细胞毒性T细胞反应,CTL表位与MHCⅠ类分子结合,被CD8+ T细胞表面受体识别,激发细胞免疫反应,这种免疫反应是抗HSV-2免疫的重要组成部分。本研究将HSV-2主要免疫原gD与gB上两种CTL表位连接构建重组基因gD-gBCTL,分别在杆状病毒表达系统和原核表达系统中进行表达,并对原核表达的重组蛋白的免疫效果进行初步评价。在杆状病毒表达系统中,以构建的重组基因为模板,分别扩增gD基因和gD-gBCTL基因,连接载体pFastBac1构建重组供体质粒,转化DH10BacTM感受态,通过转座获得重组穿梭质粒,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,用获得的两种重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白。经过筛选重组穿梭质粒、优化表达条件,使gD和gD-gBCTL蛋白都得到了较高量的表达,为下一步纯化这两种蛋白,研究它们的免疫效果奠定了基础。在原核表达系统中,构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化表达条件,His TrapTM HP柱纯化得到可溶性表达的重组蛋白。将该重组蛋白结合不同佐剂,以不同方式免疫Balb/c小鼠,测定抗体效价,初步评价添加CTL表位后重组蛋白的体液免疫效果,并建立动物攻毒模型,评价重组蛋白的免疫保护性,结果表明该重组蛋白具有较强的免疫保护作用。 【英文摘要】HSV-2 ( Herpes simplex virus 2 ) is a double-stranded DNA virus, it can cause genital herpes. HSV-2 infection is prevalent in the global, and is severer in developing countries. HSV-2 can also increase the probability of AIDS infection and cervical cancer. The vaccine plays an important role in the prevention and therapy of HSV-2 infection. The current vaccine development works focus on HSV-2 glycoproteins.Eleven kinds of glycoproteins on HSV-2 surface are the main immunogens, glycoprotein D ( gD ) and glycoprotein B ( gB ) are the most important immunogens. gD is of high homology and conservation, gB could induce neutralizing antibody and cytotoxic T cell responses. CTL can bind with MHCⅠmolecule to stimulate cellular immunity, which is an important component of the immune responses against HSV-2. In this study, the recombinant gD-gBCTL gene was constructed, which contains HSV-2 gD and two gB CTL epitopes. gD-gBCTL protein was expressed in both baculovirus expression system and the prokaryotic expression system in order to evaluate its immune effects.In