酵母细胞器荧光标记系统的开发及鉴定博士后研究工作报告本科论文.docVIP

分类号 密级 U D C 编号 上海交通大学 博 士 后 研 究 工 作 报 告 酵母细胞器荧光标记系统的开发及鉴定 Development and Characterization of Fluorescent Labeling Makers for Yeast Organelles   酵母细胞器荧光标记系统的开发及鉴定 Development and Characterization of Fluorescent Labeling Makers for Yeast Organelles 原 创 性 声 明 本人声明所呈交的博士后研究报告是在合作导师的指导下独立完成的。报告中取得的研究成果除加以标注的地方外，不包含其他人已经发表的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中进行了说明并表示谢意。本声明的法律后果由本人承担。 本人签字： 签字日期： 年 月 日 使用授权说明 为保障博士后研究报告的著作权，授权学校“有权保留送交研究报告的原件，允许研究报告被查阅和借阅，学校可以公布研究报告的全部或部分内容，可以影印、缩印或其他复制手段保存出站报告”，学校必须严格按照授权对研究报告进行处理，不得超越授权对博士后研究报告进行任意处置。 授权人： 签字日期： 年 月 日  内 容 摘 要 了解蛋白质在酵母各细胞器中的定位对于确定蛋白质功能、揭示分子交互机理和理解复杂生理过程等方面有很大的促进作用。为了方便此类定位研究，我们构建了两套含有酵母细胞器标记蛋白基因阅读框的表达克隆，分别有绿色或红色荧光蛋白标签相融合。在这些克隆中，针对特定细胞器有至少两个不同标记蛋白的亚细胞分布及形态特征符合预期对该细胞器的描述，并且它们之间可以实现共定位，其可以作为该细胞器的荧光标记。最终确定的这些标记可以分别标示酵母细胞的液泡，内质网，线粒体，过氧化物酶体，脂滴，初级内吞体，次级内吞体，顺式高尔基体及反式高尔基体。采用密度梯度离心法，对亚细胞结构进行分离，结果显示特定细胞器的两个标记蛋白在各层碘克沙醇中的分布模式类似，进一步证明了这些标记的可靠性。 关键词：细胞器，荧光蛋白，融合蛋白，密度梯度离心 Abstract Protein subcellular location prediction in yeast cell can promote scientists to determination protein functions, to reveal how and in what kind of cellular environments proteins interact with each other and with other molecules, and to understand the intricate pathways that regulate biological processes at the cellular level. To facilitate these localization experiments, we have generated a series of fluorescent organelle markers based on well-established targeting sequences that can be used for co-localization studies. In particular, this organelle marker set contains indicators for the vacuole, endoplasmic reticulum, mitochondria, peroxisomes, lipids, endosomes, and the Golgi apparatus. All markers were generated with two different fluorescent proteins (FP) (green, or red FPs) in different plasmids for URA or TRP selection, respectively. The labeled organelles displayed characteristic morphologies consistent