双水相萃取脂肪酶教案.docVIP

双水相萃取脂肪酶 摘要：本实验主要研究用双水相萃取法分离和提纯脂肪酶的技术，探究了双水相的形成条件及不同浓度的双水相体系对脂肪酶的提纯效果。同时也介绍了一些蛋白质含量及酶活检测的基本方法。 前言 脂肪酶(Lipase，EC 3.1.1.3)[3]，国内对于双水相萃取方法的研究也早在20世纪60年代就已经开始了。 与传统的蛋白质分离提纯方法相比，双水相萃取方法具有很多优点：体系含水量高，可达80％以上；蛋白质在其中不易变性；界面张力远远低于水－有机溶剂两相体系的界面张力，一般为0.5～10-4mN*m-1，有助于强化相际间的质量传递；系统中的传质和平均速度快，能耗小，分相时间短，一般只要5～15min；易于放大和进行连续性操作；萃取环境温和，生物相容性高；聚合物对蛋白质的结构有稳定和保护作用等[4]－[5]。双水相萃取的方法在蛋白质、酶、核酸、氨基酸、多肽、细胞器等产品的分离和纯化等领域中得到了广泛的应用。所以这种分离方法在蛋白质以及酶的分离提纯中有着很大的应用前景。 现在研究最多的双水相体系有高聚物/高聚物以及高聚物/无机盐体系，常用的高聚物有聚乙二醇（PEG）和葡聚糖等，无机盐主要有磷酸盐、硫酸盐等。本实验所采用的就是PEG/硫酸盐体系，另外对于一种不是很常见的双水