免疫自动化仪器分析-副本.ppt

免疫自动化仪器分析 医学检验系 刘利东 概论 概论 70年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的革命的发展 随着标记技术的发展，免疫化学可以纳入临床化学检验范畴 如今，自动化免疫分析系统更加飞速发展 自动化免疫分析的基础是抗原抗体的结合，具有高特异性；手段多是利用标记技术而将检测信号放大，具有高灵敏度 自动化免疫仪器种类（应用技术） 免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术 免疫比浊 利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法 此法准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的检测手段 比浊法与比色法 散射免疫比浊分析法 定时散射比浊分析 基本原理：免疫沉淀反应和散射比浊分析结合之技术，反应分两个阶段，预反应阶段和反应阶段（图） 保证抗原不过量的方法： 确保反应体系抗体过量 对抗原过量进行阈值限定 速率散射比浊分析 基本原理：抗原抗体结合反应的一种动态测定法，适时检测抗原抗体复合物形成的散射光信号 最快反应时间（图） 抗原过量检测（图） 免疫透射比浊 基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前方夹角为0℃（图），保持抗体过量，形成可溶性AG-AB复合物，使介质浊度发生改变。 实验要求： 选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要大、数量要多，反应时间充分。 胶乳浊度测定法 基本原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波之内不阻碍光线透过，两个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少，这种减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，当然也与待测抗原量呈正比（图） 影响免疫比浊的因素 抗原抗体比例 抗体纯度和效价 增聚剂（PEG） 自动免疫浊度分析仪的要求 校准程序，使仪器处于正常的工作状态 定标程序，保证检测结果的准确性 自动控制，保证实施实验条件中的抗原抗体反应体系要求 自动系统，障碍的检测和预警。 自动化免疫仪器种类（应用技术） 免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术 化学发光自动免疫分析 化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射现象 基本原理：标记在抗原或抗体上的发光物质在碱性介质中氧化时产生激发态的中间体，中间体回基态时产生辐射，多余的能量为发射光子，产生发光现象，再对光信号进行接收转化，可得检测物浓度 发光物质须具备：氧化致发光、光量子产额高、理化性能好 化学发光自动免疫分析类型 化学发光免疫分析（CLIA） 是一种用发光剂直接标记抗体的一类免疫分析法，用来标记的发光物必须能参与发光反应、标记和偶联后能稳定、理化性质和免疫特性不改变，多用吖啶酯类和苯酚类化合物。 化学发光自动免疫分析类型 化学发光酶免疫分析（CLEIA） 以催化反应的酶为标记物，抗原抗体结合后，其中的酶可对发光体系产生催化作用，产生发光效应。发光信号与抗原抗体的量成正比。多用的发光体系是HRP-鲁米诺。 化学发光自动免疫分析类型 微粒子化学发光免疫分析（ECIA） 也是一种酶免疫分析，用磁珠作为固相载体，增加反应体积和分离效率。标记的酶多为ALP。 化学发光自动免疫分析类型 电化学发光免疫分析（ECLIA） 一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程,其中应用了“亲和素-生物素”放大系统，使检测的灵敏度大大提高 以双抗体夹心法为例之图示（图） 化学发光自动免疫分析 化学发光免疫分析是免疫技术、发光技术和计算机系统的结合，具有特异性强、灵敏度高（pg/ml)、精密度好、准确度好等特点，越来越多的人体微量指标应用这种方法来检测，已渐渐代替了RIA。 自动化免疫仪器种类（应用技术） 免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术 荧光免疫自动化 利用荧光物质标记抗原抗体的一种检测方法 由免疫反应、荧光及计算机技术联合应用的技术 主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定 荧光免疫自动化 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）：AG-AB结合，某些荧光物质发长寿命荧光，时间分辨技术 利用长寿命荧光物质（镧氏元素铕螯合物）标记抗原或抗体，测定过程中，可利用延迟时间来消除非特异性的荧光干扰（图） 。 荧光免疫自动化 TRFIA设计中的一些注意事项： Stakes位移（图） 解离增强 荧光免疫自动化 荧光偏振免疫测定：以小分子物质与大分子物质的旋转差异而使它们对偏振光的吸收不同为依据检测小分