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第十二章 高效液相色谱检测器 紫外检测波长的选择 （1）在样品的最大吸收波长下进行检测； （2）考虑到流动相所用溶剂的截止波长 。 应用特点 （1）可选择的波长范围很大，既提高了检测器的选择性和灵敏度。 （2）流动相停止流动，记录样品池中洗脱组分的吸收行为。即可提供色谱图，又可提供光谱图。 应用特点 （1）同时得到多个波长的色谱图，因此可以计算不同波长处相对吸光度比。可以选择整个波长范围的宽谱带检测，仅需一次进样，将所有组分检测出来。 （２）在色谱运行期间可以对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图，并计算其最大吸收波长。 同时逐点进行光谱扫描，得到时间-波长-吸光度三维图形。 影响因素 3．载气流速对响应值的影响 随气体流速的增大，响应值随之减小。 4．盐对基线噪音的影响 对用作缓冲盐的盐既要容易挥发，又要 具有好的纯度 HPLC-ELSD法同时测定枸橼酸钾 色谱条件 色谱柱为Synergi Fusion-RP80 (250 mm × 4.6 mm，4 μm)；流动相为甲醇-1%甲酸水溶液（5∶95）。 ELSD检测条件 漂移管温度为40℃；雾化气体压力为3.5 bar；增益为7。 HPLC-ECD 测定多酚化合物 特 点 安培检测器 原理： 测得的电流i与每个电活性物质在电极上转移的电子数n成正比，也与通过电极表面与其反应的活性物质浓度成正比。 1. 工作电压对检测灵敏度影响最为关键。 2. 灵敏度高，最小检测限可达10-9~10-12g； 3. 选择性高，一般只对电活性物质有响应，可氧化化合物包括酚、二羟基、过氧化物等；可还原化合物包括酮、醛、共轭不饱和化合物等 4. 线性范围宽，一般104 ~ 105。 特点： 缺点： （1）流动相必须具有导电性； （2）流动相的流速、温度、pH值均敏感； （3）流动相中溶解的氧会干扰还原电流的测定； （4）电极的寿命有限，需要经常清洗或更换。 流动相组成： Agilent Zorbax SB C18（150 mm × 4.6 mm，5.0 μm）色谱柱；流动相：甲醇-0.4%磷酸，梯度洗脱。 二极管阵列检测器：检测波长分别为258 nm、282 nm、320 nm； 电化学检测器：安培检测，电压700 mV 。 理想检测器的特征 1. 适用范围广 2. 灵敏度高 3. 线性范围宽 4. 对样品无破坏性 5. 死体积小，不引起柱外谱带扩展 6. 响应快，能精确将流出物转换成电信号 7. 对流动相组成和温度变化都不敏感 一、紫外吸收检测器 （ultraviolet absorption detector, UVD) 1. 工作原理 A＝ECL 吸光度与吸光系数、溶液浓度和光路长度成线性关系， 当检测器光路长度一定时，E值越大，灵敏度越高。 E大小取决于波长和样品物质的性质，表明物质分子对 特定波长辐射的吸收能力。 2. 单波长紫外检测器 光源：低压汞灯 波长：254nm 3. 可变波长紫外检测器 4. 光电二极管阵列紫外检测器 DAD（diode array detector） PDA（photo-diode array） PDAD（photo-diode array detector） 主要特点是用光电二极管阵列同时接受来自流通池的全光谱透过光 样品与光栅的相对位置正好相反，被称为“倒光学”（reversed optics） 4. 光电二极管阵列紫外检测器（PDAD, DAD) 普通紫外：光源?单色器?检测池?光电管 DAD：光源?检测池? 单色器?光电二极管阵列 每个阵列：200 ～1024个光电二极管 波长范围：200～600nm The HPLC-DAD chromatogram of Salvia miltiorrhizae hydrophil composition X Y Z 应用： 1. 色谱峰的纯度检查 1）比较光谱法 2）吸收比法（比率色谱法） 3）双波长法 2. 色谱峰的鉴别 A 与标准品或标准光谱比较 B 三维色谱能提供更多更全面的 信息 应用： 3. 谱带宽度检测 在所选择波长范围内有吸收的所有组分都能被检测出来 应用： 4.峰抑制（peak suppression） 条件：色谱未完全分开，吸收光谱有很大差别 通过选择适当的测定波长、参比波长和带宽，使一种化合物的色谱峰被完全抑制，提高选择性，实现未分离峰的准确定量分析。 这种峰抑制技术的代价