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一氧化碳中毒对大鼠少突胶质细胞前体细胞迁移影响 　　[摘要] 目的 探?急性一氧化碳中毒（ACOP）对大鼠少突胶质细胞前体细胞（OPCs）迁移的影响。 方法 采用差速贴壁法体外纯化培养大鼠OPCs，免疫荧光法鉴定OPCs纯度和形态，将其分为两组，ACOP组：将细胞放在密闭容器内，根据体积比例注入1%一氧化碳，建立ACOP的OPCs细胞模型，处理6、24 h和48 h；对照组：不进行任何处理，在5%CO2、37℃条件下培养6、24 h和48 h。两组均在6、24 h和48 h利用Transwell方法观察OPCs迁移情况。 结果 免疫荧光显示纯化培养的OPCs 95%以上表达NG2和PDGF-α，不表达GFAP和C-D11b；对照组迁移到小室穿透膜上的OPCs细胞数量自6 h到48 h逐渐增多，而ACOP组迁移的OPCs细胞数量逐渐减少；与对照组比较，ACOP组迁移到小室穿透膜上的OPCs细胞数量在6 h开始下降，但差异无统计学意义（P 0.05），在24 h及48 h时迁移到小室穿透膜上的OPCs细胞数量明显下降（P 0.05）， the number of OPCs migrated to the transmemberane of transwell in ACOP group was decreased significantly at 24， 48 h （P 　　[Key words] Carbon monoxide poisoning； Oligodendrocyte precursors； Migration 一氧化碳（carbon monoxide）是一种无色无味的窒息性气体，人体一旦吸入过量，就会造成急性一氧化碳中毒（acute carbon monoxide poisoning，ACOP），立即造成多系统损害，其中以中枢神经系统（central nervous system，CNS）损伤最为严重，极易发生一氧化碳中毒迟发性脑病（delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning，DEACMP）。脱髓鞘改变被认为是DEACMP最主要的病理改变之一，但目前机制尚不完全清楚。少突胶质细胞前体细胞（oligodendrocyte precursors，OPCs）是脑内广泛存在的一大类胶质细胞，最初主要从室管膜区产生并经过发育期的长距离迁移而到达大脑的各个区域。OPCs的迁移过程是神经元正常形成髓鞘的必要条件，还对大脑损伤后髓鞘的修复至关重要。本研究采用差速贴壁法体外纯化培养大鼠OPCs，建立ACOP的OPCs细胞模型，观察ACOP对OPCs的迁移情况影响，探讨ACOP后CNS损伤及DEACMP的发病机制 1 材料与方法 1.1 动物与试剂 实验用SD大鼠孕鼠（E16-E18）购自军事医学科学院实验动物中心，动物合格证号：SGXK（京胎牛血清、胰蛋白酶、B27、Eagle’s MEM购自美国GIBCO公司；PDL、DAPI试剂购自美国Sigma公司；Rat FGF、Human PDGF-AA购自Peorotech公司。鼠抗NG2、兔抗PDGF-α、鼠抗GFAP和鼠抗CD11b购于美国Abcam公司；cy-3、FITC标记羊抗小鼠IgG购于中杉金桥公司 1.2 体外OPCs纯化培养 实验采用孕16 d的SD大鼠，乙醚麻醉解剖镜下取胎鼠皮层，机械分离吹打成细胞悬液并用20 μm直径的尼龙筛网过滤重悬，以3×107个/培养皿的密度种入PDL预先包被的100 mm无菌培养皿中，以含有10% FBS的Eagle’s MEM 培养液在37℃含5%CO2的培养箱中连续培养5 d。5 d后，将培养皿中的细胞用0.05%的胰蛋白酶消化并吹打成细胞悬液，1000 r/min离心5 min（离心半径为4 cm）后重悬并用20 μm直径的尼龙筛网过滤，以8×106个/培养皿的密度种入无PDL包被的60 mm无菌培养皿中，以含有10% FBS的Eagle’s MEM培养液在37℃培养箱中继续培养6 d。6 d后，将培养皿中的细胞再次用0.025%的胰蛋白酶消化，并将神经球周围生出的很多具有两极或多极突起的OPC细胞轻轻吹打成细胞悬液，1000 r/min离心5 min（离心半径为4 cm）后重悬并用20 μm直径的尼龙筛网过滤，以1×106个/mL的密度种入无PDL包被的玻片上，含10% FBS的MEM培养液培养1 d后以备实验 1.3 ACOP的OPCs细胞模型 将体外培养的OPCs细胞分为对照组和ACOP组进行实验。ACOP组：将细胞放在密闭容器内，根据体积比例注入1%一氧化碳（用一氧化碳检测仪检测，容