化疗及生物免疫疗法治疗胃癌疗效及对循环肿瘤细胞(CTC)影响.doc

化疗及生物免疫疗法治疗胃癌疗效及对循环肿瘤细胞(CTC)影响 　　[摘要] 目的 探讨化疗与生物免疫疗法治疗胃癌的疗效及对循环肿瘤细胞（CTC）的影响。 方法 将80例胃癌患者分为对照组与观察组，对照组仅采用化疗，观察组联合DC-CIK生物免疫疗法进行治疗。比较两组的疗效及两组治疗前后的CTC水平。 结果 （1）观察组治疗后的临床总缓解率显著高于对照组（P0.05），具有可比性 1.2 治疗方法 两组患者均实施常规手术治疗。术后第3周，对照组采用奥沙利铂（L-OHP）+亚叶酸钙A及氟尿嘧啶（5-FU）组成的FOLFOX化疗方案。观察组患者在上述治疗基础上联合生物免疫疗法进行治疗：采血分离，抽血前皮下注射150 μg的GM-CSF，将PBMC与GM-CSF、IL-4混合置于温度条件为37℃的恒温箱之中培育，3 d后完成抗原冲击培育，2 d后生成成熟的致敏DC，经2周后再将其回输；在外周血液之中将单个核细胞分离之后，对CIK细胞进行常规培育，1周后再经细胞培育呈阴性，再使用0.9%的NaCl溶液洗涤2～3次，同rhIL-2一起加入自身血浆之中，于2 h以内进行回输。上述生物制剂每个疗程回输2次，每隔5天后进行化疗 1.3 临床疗效评价 参考世界卫生组织关于癌症患者临床疗效评价标准，主要分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、无变化（NC）及进展（PD）。临床总缓解率（%）=（CR例数+PR例数）/总例数×100%[4] 1.4 CTC检测 （1）主要材料 激光共聚焦扫描显微镜（Laser scanning confocal microscope，LSC）（美国CompuCyte公司），滤器（德国SARTORIUS公司），8 μm孔径的聚碳酸酯滤膜（英国Whatman公司），异硫氰酸荧光素-兔抗人细胞角蛋白抗体（英国Abcam公司）、藻红蛋白（PE）-鼠抗人CD45抗体（美国e-Bioscience公司），CK8抗体（上海瑞齐生物科技有限公司）；4，6-二米基苯基吲哚（DAPI），MCF-7胃癌细胞株（中科院上海细胞研究所）。 　　（2）标本采集 首先将标本采集装置进行严格的消毒处理，使用真空采血针采集受检者肘静脉血10 mL，将穿刺后的2 mL肘静脉血弃去。肝素抗凝，4℃中保存，待检。选择SGC-7901人胃癌细胞株??建模拟胃癌患者血样，这样做的目的就是为了与上述采集标本进行对照，使用膜滤过的方法对肿瘤细胞进行富集 （3）LSC自动扫描和形态学观察 以CK8抗体（上海瑞齐生物科技有限公司）和CD45分别对SGC-7901进行筛选，阳性细胞为CK8（+）CD45（-）。经LSC扫描计数肿瘤细胞水平 （4）典型CTC判定标准 ①CTC细胞体积比周围白细胞大；②CTC细胞核经DAPI染色，比较明亮，细胞核较大，核浆所占比例较大，核分裂程度较大，且呈病理性核分裂；③经标志物荧光染色，胞浆抗CK19（+）与CD45（-），显示存在较为明显的细胞形态，且具有较为清楚的细胞界限；④细胞核面积与相应胞浆抗原染色部位面积接近。本研究中，将CK19（+）以及细胞数大于1个视为CTC阳性[5] 1.5 统计学方法 采用SPSS19.0软件对数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料采用χ2检验，P 　　[4] 刘俊，张素珍，杨牡丹，等.替吉奥联合胸腹腔注药治疗老年晚期胃癌患者胸腹腔积液[J].肿瘤研究与临床，2013， 25（11）：766-768. [5] 崇梅红，肇毅，王水.手术乳腺癌循环肿瘤细胞与原发肿瘤临床病理特征的关系[J].中华乳腺病杂志（电子版），2013，7（2）：5-10. [6] 蔡俊霞，吴锦昌，王彬，等.DC-CIK联合化疗治疗晚期胃癌的近期临床疗效观察[J].南京医科大学学报：自然科学版，2014，34（1）：36-40. [7] 李岗，周文生.前列腺癌内分泌治疗临床应用及进展[J].中华全科医学，2015，13（8）：1334-1336. [8] Jochems C，Tucker JA，Tsang KY，et al. A combination trial of vaccine plus ipilimumab in metastatic castration-resistant prostate cancer patients：immunecorrelates[J].Cancer Immunol Immunother，2014，63（4）：407-418. [9] 韩博，戚美，谭薇薇，等.去势抵抗性前列腺癌的发生发展机制及药物治疗新进展[J].山东大学学报（医学版），2015，53（9）：1-7. [10]