藻蓝蛋白别藻蓝蛋白.docxVIP

藻胆蛋白（Phycobiliprotein）是一种水溶性色素蛋白，由脱辅基蛋白和开链吡咯结构的色基通过硫醚键共价交联而成，存在于红藻，蓝藻，隐藻和某些甲藻体内，是这些藻类所特有的光合系统捕光色素。根据结构和光谱特征，藻胆蛋白被分成3个主要大类: 藻红蛋白(Phycocrythrin,PE)，藻蓝蛋白(Phycocyanin,PC)和别藻蓝蛋白(Allophycocyanin,A-PC)。藻胆蛋白除了作为光合作用捕光色素系统吸收合和高效传递光能以外，也是细胞内的贮存蛋白。它还具有多方面的应用价值。（1）天然色素：根据Kaixian报道，藻红蛋白颜色鲜艳，可作为天然色素应用于食品和化妆品工业，且易着色，无毒，无害。（2）荧光探针：藻胆蛋白具有性质稳定，荧光量子产率高，背景干扰小，易于同生物素抗体和糖蛋白等大分子交联等特点，作为新一代的荧光探针在临床诊断，免疫学，分子生物学等方面可替代同位素和酶作标记物。（3）环境监测：藻体内藻红蛋白及其它色素的不同种类及含量可通过其不同光学特征而得到区分，因而可在水体中直接检测水花，赤潮，如Cowle等报道，用一种光度计可直接探测水体中含藻红蛋白的浮游植物。（4）在医药中的应用：螺旋藻藻蓝蛋白能显著提高机体的体液免疫和细胞免疫的能力，特别是小鼠受氢化可的松损伤后，藻蓝蛋白对其免疫功能有一定的恢复作用，因此藻蓝蛋白有望成为肿瘤放化治疗中并用的生物反应修饰剂应用于临床。藻蓝蛋白和藻红蛋白具有抗肿瘤活性，如坛紫菜藻蓝蛋白对HL-60细胞生长具有抑制作用[34];螺旋藻藻蓝蛋白对人血癌细胞株HL-60、K-562和U937这三种肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用并存在浓度剂量效应，高浓度抑制作用最强；R-藻红蛋白介导的光敏反应能通过诱导肿瘤细胞出现凋亡，从而有效地杀伤肿瘤细胞，是一种很有前景地光动力药物。Iijima等（1982）的研究发现藻蓝蛋白能促进免疫系统以抵抗各种疾病。哈佛医学院的Schwartz和Shklar（1986）也研究发现螺旋藻藻蓝蛋白对一些癌细胞有抑制作用。1988年，Morcos等的试验和1995年蔡心涵等的研究也证明藻蓝蛋白有光敏作用和良好的抑癌作用。张成武1995年的研究证明藻蓝蛋白对骨髓造血具有刺激作用，可用于临床辅助治疗各种血液疾病。藻胆蛋白具有性质稳定、荧光量子产率高、背景干扰小、易于同生物素抗体和糖蛋白等大分子交联等特点，作为新一代的荧光探针在临床诊断、免疫学、细胞生物学、组织化学、分子生物学等方面可代替同位素和酶作标记物。allophycocyanin APC：蓝色蛋白晶体，分子量为104 kDa??与含巯基的蛋白耦联。用于多标记流式技术和生物芯片检测，??633nm/662nm。?2，carboxyfluorescein一种常用荧光素，比FITC受荧光淬灭影响少。与氨基反应，用于蛋白核酸标记，优于FITC，488nm/525nm粗品的制备取顿顶螺旋藻（干粉）→细胞破碎→水溶液抽取→冻干得蓝色粗晶体分离纯化凝胶过滤→羟基磷灰石核酸分离→磷酸盐溶液梯度洗脱材料顿顶螺旋藻粉、羟基磷灰石设备Sephacryl hr-200紫外分光光度计自动部分收集器高速低温冷却离心机3k30型超声波细胞破碎仪b-30恒流泵提取方法磷酸盐缓冲液循环冻融联合超声波破碎发提取藻蓝蛋白取螺旋藻粉50g加入ph7的磷酸盐缓冲液300ml于4℃浸泡后至于磁力震荡搅拌器上高速搅拌30min然后再-20℃和38℃间交替冻融数次静置30min7000r/min 4℃离心50min取上清液用50%饱和度的硫酸铵4℃盐析24h得藻蓝蛋白离心沉淀得到的藻渣用PBS溶解后超声波处理9min（功率100w。振幅25%）然后7000r/min离心40min50%硫酸铵沉淀得藻蓝蛋白。收集以上两步沉淀用10mlpbs溶解置于透析袋中2000ml10m mol/l12小时去除铵离子