血液细胞组织化学幻灯片要领.ppt

血液细胞化学染色检测方法与应用 Shi Qing 概述 细胞化学染色是在组织化学的基础上发展起来的一个学科分支，是细胞学与化学相结合而形成的一门科学，研究细胞的化学成分，在保存血液细胞形态的基础上，在细胞原位显示化学反应的结果，根据化学反应的原理，研究细胞成分的化学性质。 研究目的及临床应用 研究正常血液细胞的活动与生理功能 提高血液病的诊断和鉴别诊断水平 ?????? 确定急性白血病的类型 ?????? 有助于某些血液病的鉴别诊断 观察疗效和估计预后 ??探索某些血液病的发病原理及治疗机制 ?????? 标本的选择 ??????? BM片、血片、淋巴结印片、脾印片等均可作组化染色。 用于酶染色的标本应尽可能新鲜。 用于非酶染色的标本可在室温下放置1个月，如PAS标本。 固定的目的及方法 ??????? 目的 保持细胞生前的结构与化学成分，并使血膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏。 常用化学固定方法 甲醛蒸汽固定：将滤纸平铺于染色缸底部，加入少许40%甲醛溶液。将涂片标本放入缸内，加盖使甲醛蒸汽固定血膜5-10分钟，水洗后晾干。 液体固定：常用的固定液为乙醇、丙酮、甲醇、甲醛等，也可用两种或两种以上成分组成混合固定液。 显示方法 ????? ?? 纯化学方法 ??????? 金属沉淀法 ???????? 偶氮偶联法 ???????? 联苯胺色素法 ??????? Schiff反应 ??????? 普鲁士蓝反应 类化学方法 ? 物理学方法 复染方法 复染是细胞内化学成分显色后，为了便于观察而进行的对比染色方法。 ?????? 细胞核复染法：常用染料为苏木精、甲基 绿、核固红、沙黄等。 细胞浆复染法：常用染料为伊红、光绿等 过氧化物酶染色（Peroxidase stain, POX） 目的 急性白血病的鉴别诊断 AML：阳性 ALL：阴性 分布特点-1 原粒细胞：阴性，白血病副原粒细胞可呈阳性反应。 中性粒细胞：自早幼粒细胞起随细胞成熟阳性强度递增。阳性颗粒圆形，规则，直径与嗜苏丹黑颗粒相仿，比瑞氏染色特殊颗粒大。 嗜酸粒细胞：阳性反应，颗粒比中性粒细胞的 大，着色深。 嗜碱粒细胞：阴性反应，在CML时可出现阳性反应。 分布特点-2 在粒细胞系统中，过氧化物酶颗粒的出现和增多与特殊颗粒 的出现和增多有平行关系。 单核细胞系：原单呈阴性反应，幼单和单核细胞呈弱阳性反应。阳性颗粒少而细小，弥散分布，有的也可呈阴性反应。 其他细胞：淋巴细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性反应。有的吞噬细胞可呈阳性反应 试剂配制 0.3%联苯胺酒精溶液： 联苯胺0.3g+95%乙醇全溶后，加入亚硝 基铁氰化钠饱和水溶液1ml。可保存1-2年。 过氧化氢溶液配制： 3%过氧化氢1滴+蒸馏水5ml，须每次用时新鲜配制。 染色步骤 于新鲜涂片上滴加复方联苯胺染液3－8滴，使涂片盖满。 1－2分钟后加入等量过氧化氢溶液。 4－8分钟后用水冲洗，空气中晾干。 用瑞氏染液复染，凉干后油镜观察。 染色原理 粒细胞及部分单核细胞胞浆内的颗粒中含有过氧化物酶，该酶能分解过氧化氢，释放出新生态的氧。从而使无色的联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝。 联苯胺蓝是一种不稳定的中间产物，它可进一步氧化变成棕色的化合物 结果判断 阳性反应为蓝色或蓝棕色颗粒，定位于胞浆中。 临床意义 ALL时，原始细胞的POX阳性小于3%。 AML时，原始细胞的阳性≥3%。 在多数的M1、绝大部分M2和M3中，原始细胞的阳性率大于85%。M4和M5时，原单有时可呈弱阳性，但绝大多数的原单是POX阴性。M6，原粒和幼稚粒细胞是POX阳性，幼红细胞是POX阴性。在M7，血小板POX的活性只能在超微结构上证实。 MDS时，粒细胞白血病和感染所致的WBC增高时，成熟中性粒细胞的POX活性可能降低或消失。 CML时，成熟中性粒细胞的POX活性增强。 注意事项 已固定的血膜因为酶已破坏不能再作过氧化物酶染色。 所用过氧化氢必须新鲜，加于血膜上应能发生泡沫。过量时红细胞可出现假阳性。 过氧化氢的浓度要适当加减，过量则颗粒色深，不足则颗粒色淡。 滴加过氧化氢液之后，最好将染片置于载物台上，用低倍镜观察，发现胞浆出现阳性颗粒时，立即水洗。 糖原染色（Periodic acid-Schiff reaction, PAS） 目的 红白血病（++++