松针提取物抗肿瘤作用的实验分析.pdfVIP

目 录 摘 要…………………………………………………………………….………………1 英文缩略词表………………………………………………………….…………………5 前 言………………………………………………………………….…………………6 实验 1 松针提取物对肿瘤细胞增殖影响的实验研究………………………………8 实验 2 松针活性部位诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究………..……………………26 实验 3 松针活性部位对实体瘤鼠抑瘤作用的实验研究……….………………….33 实验4 松针活性部位对腹水瘤鼠抑瘤作用的实验研究………………………47 结 论…………………………………………………………...………………………5 1 致 谢……………………………………………………………………...……………52 参考文献…………………………………………………………………...……………53 附 录………………………………………………………………………………...…57 附录1 附图……………………………………………………………………….57 附录2 文献综述 松针抗肿瘤活性成分及药理研究进展………………………..65 附录 3 发表文章………………………………………………………………………75 摘要 摘 要 目的 筛选松针抗肿瘤活性部位，从细胞毒、诱导凋亡、免疫调节方面初探其抗 肿瘤作用机制。 方法 （1）采用溶剂法将松针醇提物分成石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水四个 提取部位，通过噻唑蓝比色法（MTT 法）观察各提取部位对人肝癌细胞株 SMMC-7721 、HepG2 ，人乳腺癌细胞株MCF-7 ，人前列腺癌细胞株PC-3 细胞增 殖的影响，初步确定松针抗肿瘤活性部位及敏感细胞株。（2 ）以敏感细胞株为研 究对象，经不同浓度松针活性部位作用不同时间后，采用流式细胞术 （FCM ）分 析细胞周期分布，检测细胞凋亡，初步探讨松针活性部位抗肿瘤作用机制，为深 入研究松针抗肿瘤作用机理奠定实验基础。 （3 ）建立肉瘤 S180 昆明种小鼠实体 瘤模型，考察松针活性部位对实体瘤小鼠的肿瘤抑制作用，验证松针活性部位抗 肿瘤作用。应用 FCM 检测 T 淋巴细胞 CD3+ 、CD4+ 、CD8+ ，免疫组化法检测脾 脏IL-2 、IL-2R 和肿瘤组织Cdk4 、Bax 、Bcl-2 的表达。（4 ）建立肉瘤 S180 昆明种 小鼠腹水瘤模型，考察松针活性部位对腹水瘤小鼠生存时间的影响，进一步验证 松针活性部位抗肿瘤作用。 结果 （1）松针石油醚部位对肿瘤细胞增殖的抑制作用较强，在一定剂量范围 内呈现出时间和剂量依赖性抑制；乙酸乙酯部位的作用次之；正丁醇和水部位的 抑制作用不明显。石油醚提取部位是主要的活性部位。4 种肿瘤细胞株中人肝癌 细胞株 SMMC-7721 细胞对松针提取物最敏感。（2 ）SMMC-7721 细胞经 0.8 mg·mL- 1 石油醚提取部位处理 24h 、48h 和 72h 后，细胞的凋亡百分率分别为 15.43%、20.73% 、13.47%，均高于0.6 mg·mL- 1 和 1.0 mg·mL- 1 剂量组。0.6 mg·mL- 1 和 0.8 mg·mL- 1 剂量组在三个检测时间点上显示出 48h 检测的细胞凋亡率较高， 而 1.0 mg·mL- 1 剂量组在72h 的检测凋亡率较高，为 10.37% 。显示松针石油醚部 位诱导 SMMC-7721 细胞凋亡存在最佳用药剂量和最适作用时间。其诱导细胞凋 亡具有周期选择性，48h 检测细胞周期阻滞在 G /M 期，72h 检测细胞周期阻滞在 2 G /G 期。（3 ）松针石油醚提取物对 S 实体瘤生长有一定的抑制作用，0.5 、1.0、 0 1 180 2.0 g·(kg·d) - 1 3 个剂量组的抑瘤率分别为 31.16% 、41.71%和42.16% 。对荷瘤