实验2 土壤病原菌的分离分离.pptVIP

实验二 土壤病原菌的分离分离培养 实验目的 掌握土壤微生物的分离方法 土壤中的微生物 1. 土壤是微生物的大本营，是人类最丰富的菌种资源库； 2. 土壤中尤以细菌最多，约占土壤微生物总量的70-90%； 3. 除细菌外，土壤中数量较多的其它微生物是放线菌（抗生素的主要产生菌）和真菌。 土传病害 土传病害是指病原菌如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在土壤中，条件适宜时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害。 Fungi in the soil Fungi are an important component of the soil microbes typically constituting more of the soil biomass than bacteria, depending on soil depth and nutrient conditions; The saprobic fungi represent the largest proportion of fungal species in soil and they perform a crucial role in the decomposition of plant structural polymers, such as, cellulose, hemicellulose, and lignin, thus contributing to themaintenance of the global carbon cycle Fungi in the soil The number of cultured fungi (~100,000) is believed to be a small fraction of the total number of extant species; Utilize direct culture and molecular methods to estimate fungal diversity and the percentage of culturable fungi in various soil and compost environments. Identify novel species and facilitate the isolation of additional fastidious fungi from the original samples. 分离土壤真菌的目的： 分析土壤中有哪些真菌(土壤真菌的定性)； 分析土壤中各种真菌的数量(土壤真菌的定量)； 分析土壤中的病原真菌。 Why can’t cultivate all the fungi The limitations of the culture techniques employed; complex interdependencies between microorganisms in soil that cannot be replicated in the laboratory; the presence of fungi in dormant or “viable but non-culturable” states. 分离的方法 1. 稀释平板法 制备土壤稀释液： 称取1g干燥的土样，倒入盛有10 ml无菌水的三角瓶中，充分振荡，即成1/10浓度的悬液。静止后，制备成1/100、1/1000、1/10000不同浓度 的稀释液备用。 倒平板 （也可以先倒琼胶培养基制成平板，二三天后用） 涂皿 每皿加0.5ml土壤悬浮液，用无菌三角玻璃刮铲涂 均匀，每浓度两个重复。标记、置28℃恒温箱培养。 纯化 2. 弹土分离法 倒平板 （也可以先倒琼胶培养基制成平板，二三天后用） 称取一定量研碎的细土于光滑纸版上，再将多余的土倾去，见纸片上黏附有一层细土。 将土样纸版带土一面向下轻轻插入无菌培养皿内。 轻动皿盖，并立即取出纸，皿上做好标记。置28℃恒温箱中培养。 纯化 镜检 3. 土壤平板分离法 无须配制土壤悬浮液，将土样直接与琼胶培养基混合后培养。每个培养皿加土壤的量要经过初步测定，一般是加5～15μg。将移植针的头打扁，制成微量刮勺，用来加土样到培养皿中和压碎结块的土粒。每一个培养皿加琼胶培养基约l0ml，与土样充分混合，制成平板培养。砂质土壤容易和培养基混合均匀，如土样过于干燥或粘重，可以将土样与1滴灭菌水在培养皿中混和然后加琼胶培养基。土样中真菌的量过大，可以将土壤与适量的灭菌砂土混合稀释。 金霉素和链霉素要在倒平板前加，其余成分则在配制培养基时加。应该指出，分离土壤真菌并没有标