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实验九 血液 一、目的要求 1.学习渗透性溶血的实验方法，观察红细胞的溶血现象； 2.掌握测定血红蛋白含量的基本方法——比色法； 3.学习血型鉴定的方法。 二、基本原理 红细胞在高渗NaCl溶液中会失去水分而皱缩，在低渗NaCl溶液中会因过多水分进入而膨胀、破裂，红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗力。 血红蛋白经少量盐酸作用而使亚铁血红素变成棕色的高铁血红素，用水稀释后与标准色比较可求出100ml血液中所含血红蛋白克数。 凝集原+凝集素 三、动物与器材 兔、肝素钠、2ml注射器、10ml试管10支、5ml吸管3支、试管架、滴管、洗耳球、血红蛋白计、一次性定量取血管、刺血针、酒精棉球、 1%和2%NaCl溶液、0.1mol/lHCl、75%酒精、生理盐水、蒸馏水、干棉球 四、方法与步骤 1. 渗透性溶血——红细胞渗透脆性的测定 1)取10支试管配置不同浓度的低渗NaCl溶液 2)每管滴加兔血液1滴 3)静置1小时观察结果 不溶血:上层浅黄、透明，下层红色、不透明 开始溶血:上层红色、透明，下层红色、浑浊不透明 完全溶血:全部液体红色透明 2. 沙利氏比色法测定血红蛋白含量 1) 认识血红蛋白计（标准比色架、血红蛋白稀释管） 2）0.1mol/lHCl加至血红蛋白稀释管刻度10处 3）采血20ul加入血红蛋白稀释管(无名指指肚,消毒并擦干,弃第一滴血) 4）静置10min 5）逐滴加入蒸馏水后比色观察 14.5g/100ml=100% 3.血型鉴定 1滴抗体（血清）+ 1-2滴红细胞悬液(1mlSaline) 4. 血沉测定----韦氏沉降 试管中预先加有肝素溶液作为抗凝剂，抗凝剂与血液之间的容积比例为1：4。如用兔血，可直接采其心血。 2. 用清洁、干燥的血沉管，小心地吸血至最高刻度“0”处。在吸血之前，须将血液充分摇均（但不可过分震荡以免红细胞破坏）。吸血时，要绝对避免产生气泡，否则须重做，将吸有血液的血沉管垂直置于血沉管架上，分别在15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时，检查血沉管上部血浆的高度，以毫米表示之，并将所得结果记录于下表： （3）取兔血的方法： ①心脏采血：将兔仰卧固定，剪去左侧相当于心脏部位的皮毛，用碘酒和75%乙醇消毒皮肤，选择心脏跳动明显处作穿刺。一般由锁骨左边缘外3cm处刺入兔的第3肋间隙。穿刺时，最好用左手触诊心脏以作配合。当针头接近心脏时，就会感到心脏的搏动，血液自然进入注射器。如认为针头进入心脏但抽不出血液，可把针头稍微退出或进入一点。心脏采血经6～7d恢复后，可以重复进行。兔一次采血量可达20～25ml。 （3）取兔血的方法： ②兔耳中央动脉采血：将兔置于固定箱内，用酒精棉球擦揉兔耳片刻，使其充血。在兔耳中央有一条纵行、较粗、颜色鲜红的中央动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器。在中央动脉末端，沿动脉平行地向心脏方向刺入动脉，轻轻抽动针筒，即可见血液进入注射器。一次可采血约15ml（采血后应注意止血）。采血一般采用6号针头，不可太细。需要注意的是兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此，采血前必须使兔耳充血。当动脉扩张未发生痉挛性收缩前立即进行，抽血的时间过长，动脉血管会发生较长时间的收缩，采血难以进行。 * * 10分钟 A凝集 A型 B凝集 B型 AB均凝集 AB型 AB均不凝集 O型 A B