PAHs实验步骤.docxVIP

实验流程一、实验前准备工作1.无水硫酸钠将无水硫酸钠放入马弗炉中在450℃下灼烧4 h，待冷却至室温后将其放入干燥器中密封保存待用。2.硅胶将硅胶放入马弗炉中在180℃下活化3h，然后趁热将其密封保存。此时硅胶的极性过强，使用前需要加入一定量的水进行去活。具体做法是在锥形瓶中加入按重量计为5%的水，先加入少量硅胶，充分摇匀后再加入一部分硅胶摇匀，最后将所需加入的硅胶全部加入，充分摇匀，放入干燥器中平衡24 h以上再使用。3.氧化铝将氧化铝放入马弗炉中在450℃下灼烧4 h，待冷却至室温后将其放入干燥器中密封保存待用。使用前加入按重量计为5%的水去活化，放入干燥器中平衡24 h以上再使用。4.玻璃棉将玻璃棉放入马弗炉中在450 ℃下灼烧4 h，待冷却至室温后将其放入干燥器中密封保存待用。5.铜粉将铜粉倒入小烧杯中加入适量正己烷，超声15min，静止24小时，倒掉正己烷，在干燥器中让正己烷挥发完全。6.器皿清洗普通玻璃器皿：超声清洗20min两次，然后用自来水、蒸馏水依次冲洗干净，置于烘箱内烘干后，锡纸封口放入马弗炉，450℃下灼烧4h，冷却后保存备用。（100mL、50mL梨形瓶，玻璃棒，烧杯，巴氏滴管，离心管，固相萃取柱，药匙等）带有刻度容器和聚四氟乙烯物品：先超声清洗20min两次，再用丙酮泡三次，然后再用正己烷泡一次。置于烘箱内烘干后，锡纸封口保存备用。（容量瓶、离心管盖、聚四氟乙烯旋塞、进样瓶、量筒等）二、样品的准备在分析前先将样品冷冻干燥，然后将其研碎，去掉其中含有的小石子、植物根系、生物残余物及其它杂质，混匀研磨后过80目筛，置于冰箱中低温(0～4℃)密封保存。三、前处理总步骤：称取5.0g沉积物，加入100μL已知浓度的氘代内标作为回收内标。然后再加入20mL二氯甲烷，超声萃取10min后离心分离，取上层清液置于梨形瓶中，重复三次。提取液在35℃下旋蒸浓缩至2~3mL，经硅胶/氧化铝柱分离净化，20mL正己烷洗脱正构烷烃组分后，再用70mL正己烷/二氯甲烷（V:V=7:3）洗脱得到PAHs组分，35℃下浓缩至约1mL, 转移至进样瓶，温和流速的氮气吹至近干并定容至1mL1.超声萃取在进行提取实验之前，将氘代回收内标加入沉积物中，用于整个实验过程的质量控制和回收率校正。加标沉积物采用超声提取，加入20mLCH2Cl2，提取10分钟后离心分离取上层清液于梨形瓶中。重复三次上述提取步骤，以确保提取沉积物中大部分有机质，如果提取液仍然有颜色，则继续重复直至无明显颜色。2.硅胶/氧化铝柱的填充取5 g已活化的硅胶放入小烧杯中，加入一定体积的正己烷，超声10 min，制成分散均匀的硅胶浆。先在层析柱底端加入一定体积的玻璃棉，用玻璃棒捣实，用来支撑硅胶。然后将制得的硅胶浆转移到层析柱中，再用正己烷分几次把烧杯中剩余的硅胶转移完全，填充时不断敲击层析柱，以便使硅胶填充结实。旋转活塞，使正己烷缓慢滴下，同时轻敲层析柱，使硅胶填充结实。同样方法加入 7 g氧化铝。在氧化铝顶端加入2g无水Na2SO4，最上层加1 g铜粉。轻敲层析柱，加入20mL正己烷活化柱子，当液面接近铜粉时关紧活塞。3.洗脱将盛在梨形瓶中的PAHs提取液于35℃旋转蒸发至2~3mL，然后将梨形瓶中的液体转移至硅胶/氧化铝柱中。加入1 mL左右的正己烷，充分振荡，使残余在梨形瓶中的PAHs完全溶解在正己烷中，本步骤重复进行三次，全部移入硅胶/氧化铝柱中。加入20 mL正己烷洗脱正构烷烃，旋开活塞，使溶液缓慢滴下（每秒1～2滴）。再用70mL正己烷/二氯甲烷（V:V=7:3）洗脱得到PAHs组分。4.浓缩定容净化过程所得的洗脱液体积一般较大，不能直接进样分析，需要对其进行浓缩定容。实验过程为：先将梨形瓶中的溶液旋转蒸发至近干，然后将剩余液体转移到进样瓶中。用1 mL左右的正己烷冲洗梨形瓶，将洗涤液转移到进样瓶中，本步骤重复进行三次，洗涤液一并转移到进样瓶中。将进样瓶中的液体用氮气吹干，加入正己烷，定容至1mL。5.空白加标回收率实验用石英砂代替沉积物样品，分别加入氘代内标和高、中、低三个浓度梯度的混标（每种浓度梯度三个样）然后走正常流程分析，计算回收率。6.基质加标回收率实验对于沉积物样品，随机选一个样品，分别加入氘代内标和高、中、低三个浓度梯度的混标（每种浓度梯度三个样）然后走正常流程分析，最后和不加混标的该沉积物结果比较计算回收率。7.平行实验每次实验时选择一个沉积物样品做平行实验，称取相同质量，走正常流程分析，最后计算相对标准偏差。8．程序空白每批实验做一次空白对照，不称取沉积物，走正常流程分析，测量分析过程中的背景值。