河南省乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因进化分析.pdfVIP

摘要 $。 摘要 ’1 r 、 流行性乙型脑炎(JapaneseEncephalitis，JE)是由嗜神经的乙型脑炎病毒 Virus，JEV)引起的人畜共患的中枢神经系统性传染病。 (JapaneseEncephalitis 猪被认为是流行性乙脑病毒在自然界中最主要的贮存、增殖宿主。在猪群中， 乙型脑炎虽不具有高致死率，但它感染后能引起母猪繁殖障碍、公猪发生急性 睾丸炎、还会导致仔猪死亡，从而给养猪业造成巨大损失。同时，猪群中的乙 脑病毒经蚊媒传播可导致人群及动物感染，危害公共卫生安全。 JEV属于黄病毒科黄病毒属，是单股J下链RNA病毒，基因组全长约11Kb， 含有一个开放阅读框，编码一个多聚前体蛋白，成熟切割后可形成3个结构蛋 白(核衣壳蛋白C、膜蛋白M、囊膜蛋白E)及7个非结构蛋白。其中，E蛋白 是JEV的主要结构蛋白之一，在保护性免疫及防制病毒感染中起着重要作用。 本实验从河南省部分规模化猪场采集母猪流产死胎脑脊液作为样本，通过 细胞培养分离乙型脑炎病毒毒株。RT--PCR扩增E蛋白基因，经基因克隆后测 序，将测序结果与减毒疫苗株SAl4一14—2E蛋白基因进行相似性比对，结果表 明扩增基因与参考毒株的E基因序列均具有95．5％以上的相似性，同源性较高， 最终确定三株分离株BY一1、ZY一2、ZMD--3确为乙型脑炎病毒，分别命名为 CSF．BY一1、CSF．ZY一2、CSF．ZMD--3。 JEV为RNA病毒，由于其基因组在复制过程中缺少校正机制而容易发生变异。 JEV重要的结构蛋白囊膜糖蛋白E，参与病毒的很多重要功能，这一区域具有很 好的保守性和充分的变异机会。因此本实验针对分离株E蛋白的核苷酸和氨基酸 序列进行进化分析，以深入了解其遗传特性和变异情况。 本实验从GenBank中选择乙脑流行的多个国家和地区的包括各个基因型的 嘴。 ～ 18株病毒的E基因序列，另选l株墨累河谷脑炎病毒株(MVEV)作为外群，以NJ 3．1 (NeighborJoining)法，分别以核苷酸序列和氨基酸序列为基础使用MEGA 线比对工具MultAlin对三株分离毒的E蛋白核苷酸序列和氨基酸序列与参考毒株 摘要 序列进行比对，以得到分离株与参考株之间的序列相似度及核苷酸和氨基酸突 ’ F、 ～ 乙脑病毒，与参考株JEV有着较高的同源性，核苷酸序列相似性在92．1％一95．9％ 之间，氨基酸序列相似性在72．1％一77．3％之间，共有19个位点的核苷酸发生碱 基突变，引起了14个位点的氨基酸突变。分离株发生突变的位点均不是JEV毒力 的关键位点，对分离株的JEV生物学特性无重要影响。 关键字：乙脑病毒分离鉴定进化分析 _ 月：^ q II t Abstrac Abstract t ■、 、I JapaneseEncephalitis(JE)，causedbyJapaneseEncephalitisVirus(JEV)that