核酸扩增仪及维护维修.ppt

话说在1983年春夏之交某个迷人的晚上 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR仪器的变迁 三个水浴锅， 用手移动 （Mullis等人当时用的） 电加热块 ＋ 自来水冷却 （PE，1988） 电加热块 ＋ 内置循环液冷却 （PE，1989） 三个加热块 ＋ 机械手 （Stratagene，1994） 半导体制冷和加热 （MJ, PE, BioMetra, Eppendrof） 温度梯度, 荧光检测 (如 Roche的Lightcycler) 风（空气）加热 Lab-on-chip式的PCR仪(所谓的芯片PCR) 中国的状况 1991年出现三个水浴锅+机械手的原始PCR仪（华美，复日等） 现在以半导体（Peltier板）制冷式为主（杭州博日,上海天呈, 厦门安普利等） 离心式实时定量PCR仪 Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪 Light CycleTM荧光定量PCR仪 离心式实时定量PCR仪 Light CycleTM荧光定量PCR仪结构示意图 实时荧光定量PCR核酸扩增仪 金属板式实时荧光定量PCR仪 离心式实时定量PCR仪 各孔独立控温的荧光定量PCR仪 各孔独立控温的荧光定量PCR仪 各孔独立控温的定量PCR仪设计非常独到，不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，各孔独立控温，可以在同一台定量PCR仪上分进行不同条件的定量PCR反应，随时利用空置的样品槽开始其他定量反应，使用效率非常高。 升降温速度高达10℃／s，控温精度高。每个模块独立控制的激发光源和检测器直接与反应管壁接触，保证荧光激发和检测不受外界干扰。 各孔独立控温的荧光定量PCR仪 该类仪器整合多通道光学检测系统，能有效分辨多种荧光染料，可对同一样品进行多靶点分析，同时检测四种荧光信号。 可使用Taq man探针、分子信标、Amplifluor引物等多种检测方法，定量线性范围可达9个数量级。其软件允许一台仪器同时操作多个样品模块，既满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现任意梯度反应。 缺点：上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。适合多指标快速检测，但目前在国内应用尚少。 荧光检测系统 激发光源 检测器 发光二极管 卤钨灯光源 超低温CCD 光电倍增管 如何选择荧光定量 PCR 仪器？ 1 、仪器使用的广泛程度 2 、仪器的检测通量（反应孔数） 3、仪器的通道数量 4、耗材的开放性 5、硬件设计特点 6、运行速度 7、灵活性 进口定量PCR仪器厂商 ABI ROChe （罗氏） Bio-Rad （伯乐） 市场占有率 市场价格 ABI ROChe Bio-Rad ABI荧光定量PCR仪 厂家介绍： 美国应用生物系统公司，经营生产生命科学设备仪器和试剂，其荧光PCR仪成系列，市场占有率高。 荧光PCR仪型号： ABI 7500 ﹥ ABI 7300 ABI 7900 ABI stepone ABI ViiA7 ﹥ ﹥ ﹥ 代理公司： 达安基因，上海创萌，创博环球，北京博凌科为，北京优尼康，北京鼎盛伟业等 ROChe 厂家介绍： 罗氏公司始创于1896年，总部位于瑞士巴塞尔，主要涉及药品、医疗诊断、维生素和精细化工、香精香料等四个领域。LightCycler以运行速度快而著称，在国内市场占有率单款最高 荧光PCR仪型号： LightCycler 2.0 ﹥ LightCycler LightCycler 480 LightCycler Nano ﹥ ﹥ 代理公司： 上海浩然，达安基因，上海博尼，山东艾克韦，济南朋远，北京博凌，上海众华，北京普生瑞等 Bio-Rad 厂家介绍： 伯乐自1952年在美国成立，在50多年中为临床诊断和生命科学研究市场提供了广泛的新型产品和服务，始终居于科学发现的中心地位。 荧光PCR仪型号： Chromo 4 Opticon 2 CFX96 IQ 5 代理公司： 上海劢瑞，上海甄明，创博环球，北京赛伯乐，黑龙江万联顺等 国产RT-qPCR仪 达安基因 DA 杭州 博日FQD 厦门安普利 GeneLight 上海