表皮生长因子刺激对肺腺癌细胞系产生外泌体影响.pdfVIP

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2017-06-23 发布于安徽
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表皮生长因子刺激对肺腺癌细胞系产生外泌体影响.pdf

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目录 E|录………………………………………………………………………………………………………………………………2 摘要………………………………………………………………………………………………………………………………4 ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………………………5 中英文缩略词表…………………………………………………………………………………7 ，l置………………………………………………………………………………………、……………………………………．-了弓I言………………………………………………………………………………………、……………………………………．．9 1实验材料………………………………………………………………………………………11 1．1实验试剂……………………………………………．．11 1．2主要仪器设备…………………………………………．12 1．3实验溶剂……………………………………………．．13 2实验方法………………………………………………………………………………………14 2．1细胞培养及表皮生长因子处理……………………………．．14 2．1．1细胞的复苏………………………………………．．14 2．1．2细胞的培养和传代…………………………………．．14 ．2．1．3细胞的冻存………………………………………．．15 2．1．4表皮生长因子处理处理及细胞上清的收集…………………15 2．2超高速离心法分离外泌体…………………………………16 2．3外泌体的鉴定…………………………………………．16 2．3．1透射电子显微镜观察外泌体的形态………………………16 2．3．2纳米示踪分析观察外泌体粒径分布及颗粒浓度……………．．17 2．3．3 Western印记检测外泌体内源性蛋白表达水平……………．．17 2．3．3．1细胞总蛋白的提取………………………………．17 2．3．3．2外泌体蛋白的提取………………………………．18 2．3．3．3蛋白浓度的测定…………………………………18 2．3．3．4Western blot蛋白印记检测蛋白表达水平……………．20 2．4荧光共聚焦显微镜观察肺腺癌细胞摄取外泌体…………………2l 2．4．1外泌体的染色………………………………………2l 2 万方数据 2．4．2荧光共聚焦显微镜上样制片……………………………22 2．5细胞学实验……………………………………………22 2．5．1细胞增殖实验………………………………………22 2．5．2细胞迁移实验………………………………………23 2．5．3细胞侵袭实验………………………………………24 2．6统计学分析方法………………………………………．．24 3实验结果……………………………………………………………………………………。25 3．1EGF对外泌体基本特征的影响……………………………．．25 3．1．1 EGF对肺腺癌H322细胞的影响…………………………25 3．1．1．1 EGF处理H322细胞形态的变化……………………．．25 3．1．1．2 EGF处理后H322细胞增殖、侵袭、转移能力明显升高……26 3．1．2EGF刺激对外泌体形态和颗粒直径的影响…………………29 3．1．2纳米颗粒示踪检测外泌体粒径分布与颗粒浓度……………．．31 3．1．3 3．1．4EGF处理对H322细胞外泌体分泌量的影响………………．．34 3．2EGF对外泌体生物学功能的影响……………………………35 3．2．1荧光共聚焦显微镜