基因工程-DNA重组技术的基本工具1.1.ppt

基因工程 小结 * 基因工程的定义 按照人们的意愿， 把一种生物的某种基因提取出来， 加以修饰改造， 然后放到另一种生物的细胞里， 定向地改造后一种生物的遗传性状。 供体生物 目的基因 在体外剪切和拼接，建构重组DNA分子 受体生物 也称基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程的目的： 赋予生物以新的遗传特性， 创造出更符合人类需要的新的生物类型 和生物产品。 基因工程的理论依据 1. DNA是绝大多数生物的遗传物质， 不同生物的DNA基本单位和结构相同 ——部分病毒的遗传物质是RNA， 其他生物的遗传物质是DNA 都由4种脱氧核苷酸聚合而组成 DNA具有双螺旋结构 脱氧核糖 磷酸 含氮碱基 脱氧核苷酸 碱基对 氢键 磷酸二酯键 基本骨架 DNA的基本结构 基因工程的理论依据 2. 中心法则： DNA RNA 蛋白质（性状） 复制 转录 翻译 逆转录 复制 在绝大多数生物中， 亲代DNA通过复制而将遗传信息传递给子代； DNA通过控制蛋白质合成而控制个体性状表达 基因工程的理论依据 3. 基因是遗传物质结构和功能的基本单位 基因是指有遗传效应的DNA片段 一个DNA分子上有多个基因 基因工程的理论依据 4. 各种生物共用一套遗传密码 ——相同的DNA碱基序列 在不同生物细胞中翻译出相同的蛋白质， 表达为相同的性状 第1节 问题探讨 手术刀 缝合针 运输工具 培育抗虫棉需要哪些基本工具? 来源 种类 作用 作用结果 阅读课本4-5页“限制性核酸内切酶——分子手术刀”的相关内容，填写下表 自主学习 主要从原核生物中分离纯化而来 已经分离出大约4000种 1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列 2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 形成两种末端：黏性末端或平末端 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 脱氧核苷酸的结构 G 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 3’,5’-磷酸二酯键 3’端 5’端 3’端 5’端 磷酸二酯键 * 仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何 特点？ 限制酶的识别序列 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRI限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaI限制酶的作用 在G与C之间切割 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物 在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机 制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细 菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会 利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的 安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切 割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的 目的。 寻根问底 为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 限制酶 DNA解旋酶 区别 限制性内切酶与DNA解旋酶的区别: 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 限制酶 DNA水解酶 区别 限制性内切酶与DNA水解酶的区别: 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片段的DNA. 切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸。 * 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表 自主学习 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键 DNA连接酶的作用 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合