人支气管上皮蛋白质样品制备方法及其癌变各阶段组织22DE.PDFVIP

( ) 中南大学学报 医学版 　2004 ,29 (4) 376 J Cent Sout h Univ (Med Sci) ① 人支气管上皮蛋白质样品制备方法及其 癌变各阶段组织 2D E 图谱的建立 1 ,2 1 1 ,3 , 1 ,3 1 1 1 1 ,3 吴晓英 , 肖志强 , 陈主初 , 李 　萃 , 李建玲 , 冯雪萍 , 易　红 , 李茂玉 ( 中南大学 　1. 湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室 ,长沙 4 10008 ;2 . 基础医学院超微结构教研室 ,长沙 4 10078 ; 3 . 湘雅医学院肿瘤研究所 ,长沙 4 10078) [摘要] 　目的: 改良、优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法 ,建立人支气管上皮癌变过程各阶段组织的 2D E 图谱 ,为识别鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础 。方法 :收集 、筛选人支气管正常上皮 、鳞状化生 、不典型增 ( ) 生和上皮浸润癌组织标本 。改良的脱氧胆酸三氯醋酸 deoxycholatetrichloroaetic acid ,DOCTCA 法提纯支气管上 皮总蛋白质 ,应用固相 p H 梯度双向凝胶电泳分离各阶段组织的总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,用 Ima geMaster 2D 软 件分析双向电泳图谱 。结果 :应用改良的DOCTCA 法提纯的支气管上皮总蛋白质进行双向电泳 ,可获得分辨率高 、 重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱 。正常上皮 、鳞状化生 、不典型增生和浸润癌 4 种组织凝胶的蛋白质 点数依次为 1 190 ±63 ,1 227 ±69 ,1 272 ±7 1 ,1 326 ±82 。选取同例鳞状上皮化生组织进行 3 次重复性检测 ,3 块凝 胶的平均蛋白质点数为 1 2 16 ±75 ,平均匹配点数为 1 082 ±67 ,匹配率达 89 . 3 % , 且 3 块胶在蛋白质点位置上有 ( ) ( 较好的重复性 ,不同胶间蛋白质点在 IEF 方向的偏差为 0 . 835 ±0 . 247 mm ,在 SDSPA GE 方向上的偏差为 0 . 92 1 ±0 . 104) mm 。结论 :改良的DOCTCA 沉淀法是一种较好的支气管上皮组织蛋白质样品制备法 ,初