TF／FⅦa体外诱导大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA的研究.pdfVIP

· 918· ! l2月第22卷第l2期 Chin J Gen Surg，December2007． V01．22．N0．12 ． 论著 TF／FⅦa体外诱导大肠癌LOVO细胞系 表达MMP一7mRNA的研究 张剑权 万远廉 刘玉村 汪欣 汤坚强 吴涛 朱静 潘义生 【摘要】 目的 观察组织因子／活性凝血七因子(TF／FVaa)诱导大肠癌LOVO细胞系表达基质 金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA及信号传导途径。 方法 构建靶向组织因子基因干扰的RNAi质粒并 稳定转染 LOVO细胞获得 TFRNAi LOVO细胞系，Western blot检测干扰效率；RT．PCR观察 100 nmol／L FV0a刺激0、4、8、12、24 h后LOVO细胞中MMP-7mRNA的变化，Northern blot证实时间效 应及测定0、10、50、100、200 nmo~L FⅦa刺激后的MMP-7mRNA水平；100 nmo~L FⅦa分别刺激 LOVO细胞0、4、8、12、16、24 h，Western blot测定p-P38的水平；Northern blot分别检测预先使用 10 mmol／L P38阻断剂SB203580 0．5 h再以100 nmol／L FV0a刺激LOVO细胞8 h及100 nmo~L FⅦa 刺激TFRNAi LOVO细胞系8 h后 MMP-7mRNA水平。 结果 Northern blot结果显示 FV0a刺激 MMP-7mRNA表达存在时间、浓度依赖性；Western blot测定FV0a刺激p-P38表达存在时间依赖性。 应用P38通路阻断剂SB203580后MMP-7mRNA基因表达下降59．2％，转染组织因子干扰质粒的 LOVO细胞中，MMP-7mRNA的表达水平较LOVO细胞组下降48％。 结论 活性Ⅶ因子与组织因子 结合诱导体外大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA，其机理可能与P38通路有关。 【关键词】 结直肠肿瘤； 肿瘤转移； 活性凝血7因子；MMP-7mRNA；P38 飞 ，F Vlla complex induce the expression of MMP mRNA via P38 signal pathway in LOVO cells of colon cancer in vitro Z删^ Jian．quan， 4N Yuan．Zia舳 ，LIU Yu．c“n， ⅣG Xin， ，vG Jian．qmng。 WU Tao，zHU】魄 ，PAN Yi·sheng,Department Df General Surgery。Peking University First Hospital， Beijing 10o034．China Corresponding author：WAN Yuan．1ian．E．mail wan@bimu、edu、ca 【Abstract】 Objeetive To investigate the expression of matrix metalloproteinase 7(MMP．7) mRNA in LOVO cells of colon cancer induced by耵1／F V0 a and its signal pathway Methods We transfected LOVO cells stably with RNAi plasmid targeting to tissue factor to get TFRNAi L0V0 cells and detected efficiency of interference in TFRNAi LOVO cells based on Western blot analysis：Expression of MMP-7 was evaluated in LOVO cells treated with 100 nmoL／L FⅦa in 0 h、4 h、8 h、12 h、24 h based on RT．PCR and Northern blot、Expression of MMP-7mRNA was determined in quiescent LOVO cells treated with different do