第十章(萃取)发酵产物的提取与精制.PPT

二、 凝胶层析法常用的凝胶 1、天然凝胶 琼脂和琼脂糖凝胶 （Sepharose）：能分离较大相对分子质量的物质，但它带有大量的电荷，层析时需使用较高离子强度的洗脱液 2、人工合成凝胶 （1）聚丙稀酰胺凝胶（Bio－Gel P） （2）交联葡聚糖凝胶（Sephedex） 三、凝胶层离技术 1、凝胶柱的制备 （1）凝胶的预处理 （2）凝胶的装填 （3）层析床的检查 （4）柱的平衡 2、样品和洗脱剂的准备 洗脱剂：试剂是分析纯、水是纯水 固体样品溶于洗脱剂中，无颗粒 3、加样 （1）加样量的选择 脱盐、缓冲液交换等组分分离时加样体积为床体积的30％，如果要求较高的回收率，则为15％～20％。 （2）加样方法和注意事项 进样器或注射器 排干法 液面下加样 4、洗脱技术 洗脱流速 高速 涡流扩散严重，导致区带变宽 5、样品的检测、收集和处理 6、凝胶过滤介质的再生、清洗和储存 再生：用1.5～2个柱体积的洗脱剂完成洗脱过程 清洗：碱液清洗（0.1～0.5moL/L的NaOH）、乙醇、非离子型去污剂 保存： 浸泡在抑菌剂的溶液中，比如：20％乙醇、0.02％～0.05％的叠氮化钠、0.01moL/L的NaOH，0.05％的三氯丁醇，0.01～0.02％的可乐酮 不锈钢层析柱 四、层离设备 1.分离柱 2.恒压储液瓶 3.恒流泵 4.洗脱液收集器 5.恒温设备 五、凝胶层析法在发酵中的应用 1、脱盐 2、凝胶层析法去除热源物质 3、凝胶浓缩高分子溶液 4、测定高分子物质的相对分子质量 5、分析  第六节 浓 缩 浓缩：将低浓度溶液通过出去溶剂变为高浓度溶液 常用的浓缩的方法：蒸发浓缩法、冰冻浓缩法、吸收浓缩法、超滤浓缩法 一、蒸发浓缩法 （一）蒸发机理： 将溶液加热沸腾，使溶剂气化除去，从而提高溶液中溶质的浓度 溶液表面的溶剂分子获得的动能超过了溶液内溶剂分子间的吸引力脱粒液面逸向空间的过程 影响蒸发的因素： 温度、蒸发面积、蒸汽压大小 （二）蒸发浓缩的分类 常压蒸发浓缩、真空蒸发浓缩 （三）蒸发浓缩过程的选择和要求 要更加溶液的性质来选择： 溶液的粘度、热敏性、发泡性、腐蚀性、是否结垢 （四）工业发酵中常用的蒸发浓缩过程 1、强制循环蒸发浓缩过程 2、薄膜式蒸发浓缩过程：管式薄膜蒸发器、回转式薄膜蒸发器、旋风式薄膜蒸发器、离心式薄膜蒸发器、板式蒸发器 二、冰冻浓缩法 将待浓缩的溶液冷却变成固体，然后缓慢融化，利用溶剂与溶液融点的差别而达到除去大部分溶剂 主要用于浓缩生物大分子和具有生理活性的发酵产品 ? 三、吸收浓缩法 通过吸收剂直接吸收除去溶剂中溶剂分子达到浓缩的方法 常用的吸收剂：聚乙二醇、聚乙烯吡咯酮、蔗糖、凝胶 四、超滤浓缩法 一、沉淀法概述 利用某些发酵产品能与某些酸、碱或盐类形成不溶性的盐或复合物而从发酵滤液或浓缩滤液中沉淀下来或结晶析出的一种提取方法 1、氨基酸沉淀法： 等电点法 盐酸盐法 金属盐法 有机溶剂沉淀法； 2、酶制剂沉淀法： 盐析法 有机溶剂沉淀法； 3、抗生素沉淀法：如四环素与钙形成沉淀； 第 六 节 沉 淀 法 二、等电点法 两性电解质在溶液中可解离为阳离子和阴离子，在一定pH条件下，两种离子浓度相等时，溶液静电荷为零，此时电解质溶解度最小而发生沉淀。 三、盐析法 中性盐沉淀法。添加中性盐析剂，破坏酶蛋白的胶体性质，消除微粒周围的水化膜和微粒上的电荷，促使酶蛋白沉淀。 （一）盐析原理 （1）破坏水膜层 （2）中和电荷 （二）影响酶制剂盐析的主要因素 1、盐析剂的种类 不同的盐，盐析效果不同 MgSO4Na2SO4(NH4)2SO4、NaH2PO4 2、盐析剂的用量 3、盐析的温度 4、盐析的pH值 5、酶液中的杂质 四、有机溶剂沉淀法 1、有机溶剂沉淀法的原理 破坏蛋白质的水化层 2、有机溶剂沉淀法提取酶制剂的影响因素（1）有机溶剂的种类和用量 （2）温度 （3）pH （4）时间（5）溶液中的盐等杂质 五、热沉淀 六、其他沉淀法 非离子型聚合物：聚乙二醇 聚电解质：酸性多糖、羧甲基纤维素、海藻酸钠、果胶酸盐、卡拉胶 多价金属离子：Ca 2＋、Mg2+ 思考题： 试设计一个分离方案来分离用细菌发酵液中的透明质酸产品（分子量为50万？分子量为500万？） * * * 4、在低温和普通温度时，离子的化合价越高，就越易吸附 二价金属离子比一价金属离子容易吸附、三价的又比二价的容易 5、溶液的pH值对各种树脂的影响是不同的 六、影响离子交换速度的主要因素 （1）