第二章 抗原与抗体-课件.pptVIP

抗原抗体反应的原理 交叉反应 (Cross Reactivity) 沉淀反应和凝集反应 抗原抗体反应的应用 放免测定、Elisa、Western Blot······ 抗原抗体反应的原理 抗原抗体之间的相互作用力： 氢键 离子键 疏水作用力 范德华力 亲和力可以用来衡量抗原抗体的结合能力 平衡透析法确定亲和力常数 抗体与单价抗原的作用 亲和力的测定 抗体与多价抗原的作用 亲合力（avidity） 一个抗体与整个抗原的结合能力。 亲合力大大强于每一位点的亲和力，其强度增加不仅仅是亲和力的简单相加，而是呈几何级数上升的。 交叉反应 交叉反应是指不同抗原分子上有相同或相似的抗原决定簇,一种抗体可以与两种或两种以上的抗原发生反应。 沉淀反应 可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应(precipitation reaction)。 凝胶中的沉淀反应 电泳条件下的沉淀反应 凝集反应 颗粒性抗原(如细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒)与相应抗体结合，在一定条件下可形成凝集团块的现现象称为凝集反应(agglutination reaction)。 放射免疫测定 (Radioimmunoassay, RIA) 酶联免疫吸附测定 (ELISA) Western Blotting 免疫沉淀 (immunoprecipitates) ——磁珠分选 免疫荧光 (immunofluorescence) 荧光与流式细胞术(Flow Cytometry) 免疫胶体金与电子显微镜 * * * * * * * * * * * * * * * * * * 固定区基因间的种类转换(class switching) 种类转换: B细胞抗原刺激后，重链DNA进行进一步的重排，VHDHJH 能与任何CH基因片段结合。这一过程称为种类转换或同型转换，其参与的DNA侧翼序列(转换区 ，switch regions) 位于每个CH片段的上游。 转换信号来自于细胞因子。 IL-4诱导的种类转换机制 Ig基因表达 （mIg or sIg） Ig基因表达(同时表达IgM和IgD） 免疫球蛋白的合成、装配和分泌 免疫球蛋白基因的转录调控 第四节  抗原-抗体相互作用 主要内容 抗原抗体反应的化学平衡 平衡常数 平衡常数又称为亲和力常数(affinity constant) 解离常数 r：表示结合的抗原浓度与总抗体浓度的比率 c：表示游离的抗原浓度 n：表示抗体的价数 Polyclonal antibody 固定区与抗体生物活性 CL和CH1：有助于提高抗原结合，升高Fab臂最大旋转性，参与抗体多样性 铰链区（IgA、IgD、IgG）,富含Pro和Cys，富有弹性，形成二硫键 IgE、IgM的CH2区功能不确定 IgA、IgD、IgG的CH2或IgE、IgM的CH3连接有糖基，因而亲水性较强， IgM、IgG通过此结构域激活补体，发生生物学效应。 抗体Fc片段上两结构域共同与细胞膜Fc受体结合，发挥不同的生物学效应。 分泌免疫球蛋白(sIg)与膜结合免疫球蛋白(mIg) Secreted immunoglobulin（sIg） Membrane-bound immunoglobulin（mIg） sIg的重链羧末端结构域（IgA、IgD、IgG的CH3或IgE、IgM的CH4）在结构和功能上不同于mIg的相应结构域 sIg:亲水型aa组成 mIg包括三段不同序列： 胞外亲水序列 疏水跨膜序列（26aa） 胞质部分 B细胞不同发育阶段表达不同类型的Ig B细胞不同发育阶段表达不同类型的Ig,但表达不同类型Ig的同一细胞，其抗原特异性一致。 免疫球蛋白种类与功能多样性 免疫球蛋白的抗原决定 同种型（Isotype） 由C区决定 同种异型（Allotype） 由C区同一基因位置上不同等位基因的差异决定 独特型（Idiotype） 由可变区决定 Fc受体识别抗体Fc区 抗体—B细胞 Fc受体—B细胞、T细胞、中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞 免疫球蛋白超家族 单克隆抗体 多克隆抗体： 抗原多个表位诱导多种B细胞克隆增生与分化，产生多种抗体的混合物 单克隆抗体：单个抗原表位诱导单种B细胞克隆增生与分化，产生单克隆抗体 单克隆抗体与细胞分化簇(CD) 细胞分化