改良DAS-Dot-ELISA检测西瓜细菌性果斑病菌.PDFVIP

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2017-06-24 发布于江苏
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改良DAS-Dot-ELISA检测西瓜细菌性果斑病菌

微生物学通报 OCT 20, 2010, 37(10): 1551−1556 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 生物实验室改良 DAS-Dot-ELISA 检测西瓜细菌性果斑病菌 1,2 2,3* 3 1 4 2 2 2 熊亮斌刘箐王天昌高丽萍王婧刘姝彤宋蕤施颖波 2 2 王军平文朝慧 (1. 兰州大学基础医学院甘肃兰州 730000) (2. 甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室甘肃兰州 730020) (3. 兰州慧盟生物科技有限公司甘肃兰州 730010) (4. 甘肃农业大学食品科学学院甘肃兰州 730070) 摘要: 以硝酸纤维素膜为载体, 对 Dot-ELISA 法的封闭条件、包被抗体浓度、点样量等反应条件进行优化, 建立改良DAS-Dot-ELISA 法快速检测西瓜细菌性果斑病菌。研究发现, 以含乙二胺四乙酸二钠(EDTA)的脱脂奶粉液高温处理后用于封闭, 可有效降低背景; 轻微振荡可提高杂交效率, 减少非特异性结合。改良DAS-Dot-ELISA 可快速、经济的检测西瓜果斑病菌, 灵敏度达1.9 × 105 CFU/mL 。在对两批次种子样品的检测中, 改良 DAS-Dot-ELISA 法检测带菌率分别为8.0%和 6.0%, 与微孔板 ELISA 结果完全一致; 对每粒种子的检测结果, 改良 DAS-Dot-ELISA 法与微孔板 ELISA 吻合率平均达99.0%, 显示较好的实用前景, 同时为快速检测西瓜果斑病菌提供一种新途径。关键词: 西瓜细菌性果斑病菌, 双抗体夹心Dot-ELISA, 硝酸纤维素膜, 快速检测 An Improved DAS Dot ELISA Method for Detection of Acidovorax avenae subsp. citrulli XIONG Liang-Bin1,2 LIU Qing2,3* WANG Tian-Chang3 GAO Li-Ping1 WANG Jing4 LIU Shu-Tong2 SONG Rui2 SHI Ying-Bo2 WANG Jun-Ping2 WEN Zhao-Hui2 (1. S