02细胞生物学研究方法-4学时.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二、细胞内核酸、蛋白质、糖等成分的显示方法 为了对某些细胞成分进行定性和定位研究，利用染色剂可与细胞某种成分发生反应而着色的原理加以显示，称为组织化学和细胞化学染色方法（histochemical and cytochemical staining method）； 如：细胞内DNA和RNA的原位显示 Myofibrillar ATPase: Identifying Fast and Slow Fibers Succinate Dehydrogenase(琥珀脱氢酶): Identifying Oxidati ve Potential Promoter:GUS 是根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术，常用的标记物有荧光素和酶 免疫荧光法（immunofluorescent technique） 酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method） 免疫细胞化学 immuno-cytochemistry 二、细胞内特异蛋白质的定位和定性 免疫荧光法 酶标免疫法 利用分子探针检测细胞内特殊DNA序列、和RNA基因表达的方法。 四、细胞内特异核酸序列的定位和定性 原位杂交（in situ hybridization） 人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片 果蝇HB基因表达的原位杂交照片 五、定量细胞化学分析技术 对单个细胞进行快速定量分析分选的一门技术； 流式细胞术 flow cytometry 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 活体或在体(in vivo ) 离体或体外(in vitro ) 细胞培养 (cell culture) 就是选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术； 原代培养 (primary culture)：从动物机体取出进行培养的细胞群。 传代培养 (passage)：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。 细胞株 (cell strain) 和细胞系(cell line) 一、动物细胞培养cell culture 二、植物细胞培养 组织培养 (tissue culture)：诱发产生愈伤组织，诱导再分化可培养出再生植株 单倍体培养(haploid culture )：花药或花粉培养获得单倍体植株，人为加倍后可得到完全纯合的个体 原生质体培养(protoplast culture)： 两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合 (cell fusion)或细胞杂交 (cell hybridization) 基因型相同的细胞融合称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞称为异核体； 诱导方法：生物(病毒)、化学(PEG)、物理(电激、激光)。 三、细胞工程— —细胞融合 单克隆抗体技术 monoclonal antibody technique 英国人Kohler和Milstein 1975年将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖 显微操作技术 micromanipulation technique 第四节 细胞及生物大分子的动态变化 一、荧光漂白恢复（fluorescence photobleaching recovery, FRP）技术 荧光漂白恢复技术(fluorescence recovery after photobleaching, FRAP) 二、荧光共振能量转移技术fluorescence resonance energy transfer 三、单分子技术single molecule techniques 光镊（Optical tweezers） 磁镊（magnetic tweezers） 原子力显微镜（atomic force microscopy） How do muscles produce works? 研究生物大分子在细胞内合成、分布、定位等； 一般用3H，14C，32P，35S，135I，45Ca等； 放射性同位素标记→切片或涂片→ 曝光→ 观察 五、放射自显影技术 radioautography 135I 四、酵母双杂交yeast two-hybrid system 研究蛋白质和蛋白质之间的相互作用。 线虫 果蝇 拟南芥 第四节 用于细胞生物学研究的模式生物 大肠杆菌 酵母 小鼠 作业题 名词：ultramicroscopic structure, flow cytometry phase contrast microscope ， in vivo, in vitro, immunocytochemistry，cell cu