临床分子生物学检验 绪论.ppt

结核分枝杆菌的分子生物学检验 2.临床分子生物学检验内容及其应用 感染性基因 病 结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。 PCR扩增所选靶序列主要有65kD抗原基因、MPB蛋白基因、rRNA基因、TB IS6110插入序列、染色体DNA的重复序列等。 PCR-RFLP ，real-time PCR，等技术均可 2.临床分子生物学检验内容及其应用 感染性基因 病 2.临床分子生物学检验内容及其应用 禽流感的亚型目的基因错重PCR扩增 2.临床分子生物学检验内容及其应用 复杂性疾病 （多基因， 多因素） 高血压的分子生物学诊断 目前关于原发高血压相关的易感基因的研究现状：1号染色体位于1p36.1的ECE1基因以及1q42-q43的AGT基因是人类血压调节的候选基因。 2号染色体2p25-p24是原发高血压的易感位点。 3号染色体位于3q21-q25的AGTR1A基因以及3p14.1-q12.3是与原发高血压相关。 4号染色体位于4p16.3的ADD1基因与盐敏感性原发性高血压相关。 7号染色体位于7q22.1的CYP3A5基因与盐敏感性原发性高血压相关；位于7q36的NOS3基因与妊娠高血压相关。 11号染色体研究提示位于11q的数量性状遗传位点与血压的调节相等。 2.临床分子生物学检验内容及其应用 复杂性疾病 （多基因， 多因素） 肿瘤的基因诊断 肿瘤基因诊断的常用方法 PCR、RT-PCR，Southern blot杂交技术、Northern blot杂交技术，基因芯片 ，基因测序等。 胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌等， 在p53,ER ras等基因上会有点突变。 结肠癌、肾癌、乳腺癌、脑瘤等CD44，muc-1,VLA-4等 基因的拼接会产生改变。 组织特异性基因标志物 2.临床分子生物学检验内容及其应用 复杂性疾病 （多基因， 多因素） 存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于其他细胞。 如CEA mRNA、AFP mRNA、PSA mRNA等 血管生成因子,如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。 肿瘤基因诊断的常用方法 PCR、RT-PCR Southern blot杂交技术、Northern blot杂交技术 基因芯片 基因测序。 2.临床分子生物学检验内容及其应用 耐药性分析 结核分枝杆菌的耐药性检测 耐利福平分子机制：是由于其作用靶标—结核杆菌DNA依赖RNA聚合酶β亚单位的编码基因（rpoB）突变所致。 当rpoB中507~533位密码子的核心区域—耐利福平决定区(RRDR)发生突变时，结合分歧杆菌表现为耐药 耐异烟肼分子机制：结核杆菌耐异烟肼与过氧化氢酶-过氧化物酶编码基因(katG)、烯酰基还原酶编码基因(inhA)、烷基过氧化氢酶还原酶编码基因(ahpC)、β2S酮酰基酰基运载蛋白合成酶编码基因(kasA)有关。 主要是katG基因的点突变、缺失、插入。 耐氨基糖苷类药物：rpsL基因发生突变 耐吡嗪酰胺：pncA 基因突变 2.临床分子生物学检验内容及其应用 细菌分型 16SrDNA是细菌分型最常用的目标基因 细菌中包括有三种核糖体RNA，分别为5S?rRNA、16S?rRNA、23S?rRNA。5S?rRNA虽易分析，但核苷酸太少，没有足够的遗传信息用于分类研究；23S?rRNA含有的核苷酸数几乎是16S?rRNA的两倍，分析较困难。而16S?rRNA相对分子量适中，又具有保守性和存在的普遍性等特点，序列变化与进化距离相适应，序列分析的重现性极高。 3.临床分子生物学的问题以及标准化 标准化 临床实验室分子诊断现已成为临床检验各学科分支中最具发展潜力的领域,其涉及病原体核酸、人类基因和各种蛋白等大分子的测定,是临床疾病诊断中不可或缺的手段 但在临床应用中,目前仍存在同一实验室不同检测批次间或不同实验室对同一标本检测间结果的差异,这已成为时常困扰临床医师、患者以及实验室技术人员的普遍性问题。 仪器设备、试剂生产厂家和临床实验室本身在临床实验室分子诊断标准化中起着非常关键的作用。 标准化 标准化 3.临床分子生物学的问题以及标准化 通常临床实验室分子诊断标准化应 主要包括以下几个方面 。 通常临床实验室分子诊断标准化应主要包括以下几个方面。 一、临床标本采集、运送和保存的标准化 对这些标本的采集、运送和保存的标准化主要是对标本采集的具体方法、所用容器、采集量、采集时所用材料和用具、运送方式和不同时间中标本保存条件等做出明确而又详尽的规定,写成标准操作程序 二、临床标本制备处理和核酸提取方法的标准化 。 在抗原和抗体的 免疫学测定中 , 临床标本中存在的干扰物质 ,