反相液相色谱分离芳香烃.pptVIP

反相高效液相色谱法分离芳香烃;背景;色谱法的基本原理;慢 中等 快;22.1色谱的基本概念;分配系数 可由Langmuir方程得出 Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度 ;保留时间（tR）和保留体积（VR） 反应样品在柱子中的保留或阻滞能力，是色谱过程的基本热力学参数之一。 ;高效液相色谱(HPLC);高效液相色谱的特点;HPLC的分类;反相色谱reversed phase chromatography, RPC;30μm; 应用： 主要应用于5000KD以下，特别是1000以下的非极性小分子物质的分离 蛋白质：可以应用，但存在变性的危险。;实验仪器及试剂;仪器组成; 分离系统：该系统包括色谱柱(有时会配保护柱)、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由“优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固??相（由基质和固定液构成）．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。检测系统：紫外检测器、二极管阵列检测器、示差折光检测器、荧光检测器等 此外还要有储液瓶及废液瓶，有的还要配脱气机（四元低压）、混合气（二元高压）。 ;;实验步骤;2、开机;3、设置分析参数 ;4、平衡色谱系统;进样、采集运行;清洗系统和关机;实例：中药决明子HPLC色谱图;5个标准品;样品与标准物质对照图谱