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基因工程： 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 操作技术 结果 原理 DNA重组技术 生物体外 DNA分子水平 体外DNA重组、转基因等技术 基因 人类需要的新生物类型和基因产品 基因重组 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 一、基因工程的基本工具： ④作用特点： 主要是从原核生物中分离纯化出来的 蛋白质 ③作用： ①来源： ②化学本质： 能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列， 并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯链断开。 ⑤切割方式： 催化作用：所以可重复利用可用于目的基因的切割和载体的切割 错位切：产生两个相同的粘性末端平 切：形成平末端 用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在指定位置画出质粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。 2、DNA连接酶——“分子缝合针” 常用类型 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端或平末端 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 例1 下面的表达式不能反映DNA聚合酶的功能，这是因为_______________。 （与DNA聚合酶区别） 3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” ①类型： 最常用载体：质粒（其本质是小型DNA分子，不是细胞器） 其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等 ②功能： 将目的基因导入受体细胞。 ③应具备条件： a．能在宿主细胞内稳定保存并大量复制； b.有一个至多个限制酶的切割位点，以便于与外源DNA（基因） 连接； c.有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （一）目的基因的获取 二、基因工程的基本操作程序： ①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 1、基因文库的种类： 基因组文库： 含有一种生物的全部基因 部分基因文库： 含有一种生物的部分基因。如cDNA文库 2、如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性 3、利用PCR技术扩增目的基因： （1）原理： DNA双链复制 （2）条件： 模板、四种游离的脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、引物等 （3）前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物 （4）过程： （5）方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） （6）结果： 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 从绘制的图中可以看出，当PCR扩增到第三次的时候，在第四代DNA中可以获得目的基因。 （二）基因表达载体的构建（基因工程核心） 二、基因工程的基本操作程序： 启动子+目的基因+终止子+标记基因 1、组成： 2、构建过程： 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 转化： 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 ——显微注射法 ——感受态细胞 受体细胞 稳定 表达 （三）将目的基因导入受体细胞 1.农杆菌特点： 2.过程 易感染双子叶植物和裸子植物。 Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上 当植物受损伤时,伤口处的细胞会分泌酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞。 3、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 4、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 检测— 鉴定— ①检测转基因生物的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交 抗原-抗体杂交 （四）目的基因的检测与鉴定——检查是否成功 1、（11四川）北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是 （ ） A．过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序 B．多个抗冻基因编