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抑癌基因PTEN与乳腺癌转移相关性研究 中文摘要 【目的】 andtensin 第10号染色体上缺失的与张力蛋白同源的基因(phosphatase deletedchromosome homology 10，PTEN)是继发现P53后又一个与多种肿瘤发生 发展密切相关的抑癌基因，而且是发现的第一个具有双重特异磷酸酶活性的抑癌 基因，也是最近研究较热的基因之一。许多的文献报道，PTEN基因阻碍细胞 G1期向S期过渡，抑制细胞增殖，同时可以从多条信号途径促进细胞凋亡。但 adhesion 由于此基因在结构上与张力蛋白高度同源，且粘着斑激酶(focal kinase， F觚)是其天然的作用底物，所以有理由推测PTEN基因对细胞的运动迁移能力 有着重要的影响。国外学者已经在前列腺癌、膀胱癌的研究中发现PTEN基因可 以在～定程度上抑制肿瘤细胞的迁移，但其作用机制尚未明了。本研究旨在探讨 PTEN基因对乳腺癌细胞粘附、侵袭能力的影响及其机制，以期PTEN基因能成 为乳腺癌转归、预后评价的有用指标，为临床诊断和治疗提供理论依据。 【方法】 PTEN质粒分别转染入PTEN基因缺失的乳腺癌细胞株ZR．75．1，用嘌呤霉素成功 水平检测质粒是否成功转入并获得表达。通过粘附、侵袭实验比较pBP．wt．PTEN、 达情况及RT-PCR检测各组细胞P53mRNA水平分析PTEN基因对FAK磷酸化、 转移间的关系及可能机制。 【结果】 (1)pBP—wt—PTEN、pBP—G1 DH5 O细菌中成功转化，并经限制性酶切反应确定所提取的质粒是我们 希望得到的三种质粒。 光质粒共同转染ZR．75．1细胞，通过可光下计数细胞总数，荧光显微镜下 90．5％。 计数成功转染细胞数，而得到它们的转染率分别为93．％、89％ff：171 (3)用0．8mg／mL嘌呤霉素从转染细胞中筛选到成功转染细胞，并通过PCReli Western．blot证明筛选出的细胞是质粒成功转入并获得表达的细胞。 的细胞粘附抑制率分别为65．7％，8．8％和43．5％。侵袭抑制率分别为 70．4％，6．9％和63．5％． 129R-PTEN和 (5)Western-blot分析表明pBP—wt—PTEN、pBP—G pBP．G129E—PTEN三种质粒转染的细胞总FAK水平差异无显著性，但 pBP．G129E．PTEN细胞无差异。 pBP—G129E—PTEN三种质粒转染的细胞MMP一2水平彼此问差异具有统 水平差异无显著性。 mRNA水平高于 (7)RT-PCR分析显示，pBP-wt．PTEN细胞P53 细胞，但pBP—G129R．PTEN细胞与未经转染细胞问差异无显著性。 【结论】 野生型PTEN基因表达产物具有双重特异性磷酸酶活性，包括脂质磷 酸酶活性和蛋白磷酸酶活性。PTEN基因对乳腺癌细胞迁移具有抑制作用， 其作用机理与其磷酸酶活性有关，其中蛋白磷酸酶活性可能发挥主要作用， 2 它能使FAK等蛋白去磷酸化，从而影响细胞变形运动、粘附、侵袭能力。 同时，PTEN能降低MMP．2蛋白表达水平，而降低其水解Ⅳ型胶原纤维能 力；上调P53转录水平增强P53凋亡信号，促进细胞凋亡也可能是其作用 机制的一部分。因此，PTEN基因有希望应用于评估乳腺癌发生转移的可能 性大小，为临床治疗和估计预后提供实验依据。 【关键词】 PTEN；细胞迁移；蛋白磷酸酶活性；脂质磷酸酶活性；基因诊断 金属基质蛋白酶-2；粘着斑激酶；P53 Researchont