任务八可见分光光度法.ppt

* 可见分光光度计 光 源 吸收池 检测器 单色器 数据处理系统 一、可见光分光光度法 一、仪器结构框图 * 1、光源 基本要求： 在仪器工作的波长范围内，提供连续、有足够发射强度和良好稳定性的复合光，而且发射光的强度随波长的变化应尽可能小。 常用光源：钨丝灯和卤钨灯，可使用的波长范围在360 ~2500nm。 * 2、单色器 单色器作用：从光源发出的复合光中分出所需要的单色光。 单色器组成：由入射狭缝、准光器（透镜或凹面反射镜使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狭缝等组成。 单色器的核心部分是色散元件（如玻璃棱镜和光栅），起分光的作用。 * 吸收池用于盛放分析试样； 可见光区只能用玻璃吸收池； 吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向； 吸收池要配对。因为吸收池材料本身吸光特征以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。 3、吸收池 * 检测器的功能：检测信号、测量单色光透过溶液后光强度变化。 常用的检测器有光电池、光电管和光电倍增管等。 4、检测器 * 分光光度计的使用 预热20min。 调节T = 0。 调节T = 100% （A=0）。 测定样品的吸光度A。 * 分光光度计的保养与维护 安置在干燥、无污染的地方； 仪器停止工作时，必须切断电源，应按开关机顺序关闭主机和稳流稳压电源开关； 比色皿使用完毕后，立即用蒸馏水或有机溶剂冲洗干净，把水渍擦净； * 邻二氮菲法测定微量铁 根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。 * 在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+： 此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl- 测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。 * 1. 配置一系列标准溶液; 2. 测定其中一标准溶液的吸收曲线,找到最大吸收波长; (空白溶液为参比) 3. 在最大吸收波长处,测定一系列标准溶液的吸光度,作标准曲线; (空白溶液为参比) 4.在最大吸收波长处,测定试样的吸光度 5. 根据标准曲线,得到试样中铁含量. 实验步骤及数据处理 * 1.分别移取10μg/mL铁标准溶液0.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 mL 于6个50mL容量瓶中，各加入1 mL 10%盐酸羟胺，摇匀， 经2min后，再加5mL1mol/L NaAc溶液及3mL0.1% 邻二氮 菲，蒸馏水定容。 2.吸收曲线的绘制 用1 cm吸收池，以试剂空白溶液(1号)为参 比，在440～560 nm之间，每隔10 nm测定一次标准溶液(2号) 的吸光度A，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收 曲线，从而选择测定铁的最大吸收波长。 3.标准曲线的绘制 以试剂空白溶液(1号)作参比，1cm比色 皿，在最大吸收波长处，测定标准系列各个吸光度，以铁含 量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 4.吸取5mL试样，其余步骤与3同，测定吸光度。由试样的吸 光度在标准曲线上查出相应的铁含量，然后再换算出试样中 的铁含量（mg/L） * * * 1 * 基本部件 光源 单色器 吸收池 检测系统 稳压电源 光电管、光电倍增管 二极管阵列、CCD 石英：紫外，可见 玻璃：可见 棱镜光栅 紫外：氘灯 可见：碘钨灯 紫外可见：氙灯 * 一、 主要部件（五个部件） 光源 单色器 吸收池 显示器 检测器 （一）光源 1．光源：提供入射光的装置 钨灯或卤钨灯——可见光源 350~1000nm 氢灯或氘灯——紫外光源 200~360nm * 光源 氘灯：160?375 nm 钨灯：320-2500 nm 氙灯：250-700 nm 氘灯示意图 * 2．单色器： 将来自光源的复合光，按波长顺序色散分离出所需波长的单色光 包括狭缝、准直镜、