分离纯化策略.ppt

* 中药与天然产物活性成分的分离纯化 ——技术与策略 生命科学与生物药物的发展 基因组 蛋白质组 次生代谢产物组 DNA RNA 蛋白质（酶） 次生代谢产物 基因工程药物 中药活性成分 天然产物活性成分 色谱 中药与天然产物研究存在的问题 化学成分复杂 有效成分种类很多：生物碱、甙、黄酮、醌、多酚、内脂、香豆素、 萜、有机酸、寡糖、多糖、环肽、甚至蛋白质 数种有效成分并存，并一起作用 合成前体相同，配基链长不等 手性特征差异 含量很低 中药与天然产物分离纯化技术 提取 溶剂分配 超临界萃取 气相色谱 液相柱色谱 高速逆流色谱 分离操作 分析或半制备，亲脂性物质 分析，低沸点物质 分析、制备、生产，亲水性、亲脂性物质 分析、半制备，亲脂性物质 New 色谱技术的应用 天然产物色谱纯化理论滞后 研究方法替代生产工艺的模式 工艺技术单一 正相层析（硅胶和大孔树脂） 反相层析（C柱）、配合结晶技术 存在的问题 需要全面发展色谱技术 大孔吸附树脂 离子交换色谱 分子排阻色谱 亲和色谱 反相色谱 高速逆流色谱 分离纯化策略 涉及分离技术选择的因素 提取的方法 提取物或混合物样品的复杂程度 样品的制备 样品的极性 样品的稳定性 样品的溶解度 样品量 分离技术的互补性 配合各种色谱技术是解决问题的最佳途径 分离纯化策略—— 亲水性化合物 大孔吸附树脂 离子交换色谱 亲水性分子排阻色谱 亲和色谱 分离纯化策略—— 亲水性化合物 大孔吸附树脂 快速、高效、成本低 适宜于单味药某类成分某极性段的单向提取 不方便、不适于工艺放大：以聚苯乙烯为骨架，含有小分子致孔剂、交联剂等，在提取物中有较大残留。 吸附量下降至30％以上则不宜于再使用。 主要用于含生物碱、皂苷、蒽醌、水溶性酚性物质等中药单方或复方。 分离纯化策略—— 亲水性化合物 离子交换色谱 典型的高选择性层析，分辨率高，载量大，工艺控制简单，规模容易放大 具有显著的浓缩效果，能够从含量低的大量样品中捕捉目标 ，适合于初步纯化 再生能力强 多糖、肽类、皂甙等具有生物活性物质，需要温和分离纯化条件 生物酸、生物碱等较强极性，对离子交换色谱选择性高的物质 阴离子交换 阳离子交换 pka binding to cation exchanger binding to anion exchanger + - net charge pH 10 2 分离纯化策略—— 亲水性化合物 离子交换色谱 R-COOH, pKa=5.0 pH5.0, R-COOH pH5.0, R-COO- R-NH2, pKa=8.0 pH8.0, R-NH3+ pH8.0, R-NH2 分离纯化策略—— 亲水性化合物 离子交换树脂 有机酸 糖 糖醇 甙类 甾类、萜类及多环化合物 配糖体 小肽 氨基酸 核苷酸 阳离子交换—— 可以直接从中药的稀酸浸提液中捕捉生物碱 从黄连中分离盐酸小檗碱 从苦参中分离苦参碱、槐定 碱和氧化苦参碱 从虫草中分离虫草素 分离纯化策略—— 亲水性化合物 离子交换色谱 阴离子交换—— 可以直接从中药的稀碱浸提液中捕捉生物酸、皂甙、内酯、多酚、醇类等 从葛根中分离葛根素 从三七中分离三七素 从柴胡中分离柴胡皂甙 以及甘草酸、阿魏酸、咖啡酸、阿魏酸等的分离 UNOsphere S MacroPrep High S MacroPrep CM Uno S UNOsphere Q MacroPrep High Q MacroPrep DEAE Uno Q 粉防己碱 防己诺林碱 阳离子交换适合生物碱的纯化 分离纯化策略—— 亲水性化合物 离子交换色谱 分离纯化策略—— 亲水性化合物 亲水性分子排阻色谱 原理 分离纯化策略—— 亲水性化合物 亲水性分子排阻色谱 按分子量大小分离 去除高分子量成分和聚合物 小分子较高分辨率分离 100 1,000 10,000 100,000 Bio-Gel P2 Bio-Gel P4 Bio-Gel P