技术文件3 - Dynamica (Asia).PDF

Dynamica Scientific Ltd. 13 Vermont Place Tongwell, Milton Keynes MK 15 8JA, United Kingdom P: +44 1908 334 172 Email: info@ 技術文件 3 使用 Dynamica HALO MPR-96 酶标仪进行甲胎蛋白(AFP)定量测定 简介: 甲胎蛋白（AFP）是 1956 年在人胎儿血清中发现的一种专一性的甲种球蛋白。AFP 是原发性肝癌的重要 指标。血清 AFP 含量的检测对很多肿瘤的检测都有重要临床价值，如原发性肝癌、胃癌、胰腺癌等患者 血清 AFP 含量将会升高。某些非恶性肝脏病变，如病毒性肝炎、肝硬化，AFP 水平亦可升高。 AFP 试剂盒适用于体检、胎儿畸形、死胎及肝癌普查，可用于原发 性肝细胞癌及胎儿神经管发育异常的早期辅助诊断。 本文将介绍采用双抗体夹心 ELISA 方法，使用 Dynamica Halo MPR-96 酶标仪，定量检测标准 AFP 的含量，用于临床检测血清或 血浆样品中未知 AFP 的含量。 。 方法: Dynamica Halo MPR-96 酶标仪 1. 检测仪器：Dynamica Halo MPR-96 酶标仪 2. 试剂盒：甲胎蛋白（AFP）定量测定试剂盒 3. 检测原理：采用双抗体夹心 ELESA 法，酶标板上预包被抗 AFP 单抗，可与样品中 AFP 反应结合， 配合加入 HRP 标记另一株 AFP 单抗，然后用 TMB 底物作用显色，显示强度与样品中 AFP 的浓度成 正比。通过 MPR-96 酶标仪检测吸光度（OD 值），按照 AFP 校准品制定浓度曲线，可计算未知样品 中 AFP 的含量。 4. 步骤： --准备 AFP 校准品，浓度分别为 S0（0ng/ml）, S1（10ng/ml）, S2（20ng/ml）, S3（80ng/ml）, S4 （200ng/ml）, S5（400ng/ml） --将以上 6 个不同浓度的校准品加入 96 孔酶标板中，每孔 50uL, 每个浓度做 3 个重复。之后在各对应 孔中加入含 AFP 单抗-HRP 的酶标试剂 50uL，轻轻振荡摇匀。用密封膜封板后置 37℃温箱温育 30 分钟。之后甩干液体，并用洗涤液充分洗涤 5 遍，扣干。 --每孔加 A、B 显色剂各 50uL, 轻轻振荡混匀，37℃避光显色 10 分钟。之后每孔加终止液 50uL，轻 拍混匀，放置在 MPR-96 上，使用 450nm/630nm 进行双波长检测。 TN3-MP 结果及分析: 1. 各标准品测得的原始 OD 值及各重复组之间的比较，请见表 1 和图 1： 表 1: 各标准品的 OD 值 仪器 MPR-96 MPR-96