第五章基因表达2：蛋白质翻译.pptVIP

2、普遍性与特殊性 2、同工tRNA 信号序列特点： （1）一般带有10-15个疏水氨基酸； （2）在靠近该序列N-端常常有1个或数个带正电荷的氨基酸； （3）在其C-末端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性氨基酸，离切割位点最近的那个氨基酸往往带有很短的侧链（丙氨酸或甘氨酸）。 A P E 30S 5’ mRNA Free tRNA Polypeptide Release factor Ribosomal Subunits RF GTP 肽链的终止过程 思考： 蛋白质合成是一个高能耗能的过程，蛋白质合成过程中哪些步骤需要GTP的水解作用？ 二、真核生物蛋白质合成过程 真核生物蛋白质合成过程类似于原核细胞的蛋白质生物合成过程，最大的区别在于翻译起始复合物形成，以及各阶段所使用的蛋白质因子的种类和数量的不同。 （一）真核生物蛋白质的合成起始特点 ① 核糖体80S，由40S和60S两个亚基组成。 ② 有较多的翻译起始因子 ③ mRNA 5′端具有m7Gppp帽子结构， 3′端poly (A)尾巴结构，两者都参与起始复合物的形成 ④ 起始tRNA为Met-tRNAiMet，不甲酰化 ⑤ mRNA是单顺反子 eIF5B：替换因子 真核生物中翻译起始因子的种类和功能： eIF4B、eIF4F：识别帽子结构 eIF4E、eIF4A：形成复合体 eIF6、eIF3、eIF4C：结合核糖体的亚基 Eif2、Eif2b：输送起始tRNA 真核生物翻译起始复合物形成(区别原核生物) 原核生物：30S小亚基首先与mRNA模板相结合，再与fMet-tRNAfMet结合，最后与50S大亚基结合，形成70S起始复合物。 真核生物：40S小亚基首先与Met-tRNAiMet相结合，再与模板mRNA结合，最后与60S大亚基结合生成80S起始复合物。 原核生物翻译起始复合物形成过程 Internal Initiation model A U G 5 3 IF-2 GTP IF-2 -GTP GDP Pi IF-1 IF-3 真核生物翻译起始复合物形成过程 1 7mGpppG AAAAAAAAA PABP 4G 4A AUG AGU 4E A P E 60S 5 4 3 2 Scanning model 4B 2 3 M 1A 40S 5B M （二）肽链的延伸和终止 延伸：真核生物肽链的延伸需要EF-1和EF-2两个延伸因子 终止：真核生物只有一个终止因子（eRF） 原核生物延伸因子：EF-T (EF-Tu, EF-Ts)、 EF-G 原核生物终止因子：RF1、RF2、RF3 三、 蛋白质前体的加工与折叠 1、N端fMet或Met的切除 无论原核生物还是真核生物，N端的甲硫氨酸往往在多肽链合成完毕前就被切除。 2、二硫键的形成 mRNA中没有胱氨酸密码子，而不少蛋白质都含有二硫键。蛋白质合成后往往通过两个半胱氨酸的氧化作用生成胱氨酸。 （一）蛋白质前体的加工 二硫键的形成 3、特定氨基酸的修饰 氨基酸侧链的修饰作用包括磷酸化（如核糖体蛋白质）、糖基化（如各种糖蛋白）、甲基化（如组蛋白、肌肉蛋白质）、乙基化（如组蛋白）、羟基化（如胶原蛋白）和羧基化等等。 发生在小牛组蛋白H3前35个氨基酸残基中的4种化学修饰 蛋白质的磷酸化 4、切除新生肽链中非功能片段 ① 将多聚蛋白切开，成为几个成熟蛋白； ② 新生肽链N和C端多余部分的切除； ③ 切除中间部分，余下的部分由二硫键链接； ④ 蛋白质的内含肽的剪接 新生蛋白质经蛋白酶切割后变成有功能的成熟蛋白质。 左：新生蛋白质在去掉N端一部分残基后变成有功能的蛋白质； 右：某些病毒（反转录病毒）可合成无活性的多聚蛋白质，经蛋白酶切割后成为有功能成熟蛋白。 前胰岛素原蛋白翻译后成熟过程示意图 蜂毒蛋白只有经蛋白酶水解切除N-端的22个氨基酸以后才有生物活性。 蛋白质拼接图解 5、亚基的聚合 许多蛋白质是由二个以上亚基构成的，这就需这些多肽链通过非共价键聚合成多聚体才能表现生物活性。 6、辅基结合 Cytochrome C只有与血红素（heme）相结合才有功能。 Acetyl-CoA羧化酶常与Biotin分子相结合。 例如：成人血红蛋白由两条α链，两条β链及四分子血红素所组成。 （二）蛋白质的折叠 体内蛋白质折叠与肽链合成同步进行。 蛋白质的折叠是当前生命科学领域的研究前沿之一。 需要助折叠蛋白（folding helper）的参与： A、折叠酶 蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase，PDI) ： B、分子伴侣（Molecular chape