细菌rpod基因在烟草植物叶绿体中表达的研究.pdfVIP

细菌rpoD基因在烟草植物 叶绿体中表达的研究 摘要 众多证据表明高等植物叶绿体源于古代的硫细菌，因而其转录和翻译机 制与原核生物十分相似。叶绿体中存在至少两种完全不同的转录机制：其一 为质体本身编码的RNA聚合酶(PEP)负责转录与光合作用有关的基因；另一 为细胞核编码的RNA聚合酶(NEP)转录质体内的基因，此类基因多为与叶绿 体结构有关的持家基因。NEP聚合酶为单亚基酶，在植物细胞质中合成，经 由导太引导进入叶绿体。PEP聚合酶则由多亚基组成，但其对叶绿体基因的 因合成，在叶绿体内识别具有细菌启动子特征的基因。将质体sigma类似因 现，在氨基酸的C端功能域有四个一致的保守区，这些保守区均在组成RNA 聚合酶全酶和识别基因的启动子中起关键的作用。分子生物学的实验进一步 所识别；在叶绿体trc(；FP转基因烟草植物申由细菌trc启动子驱动的绿色 萤光蛋白基因(善，翻可以被叶绿体内的转录和翻译系统正确识别、转录和合 成蛋白。这些证据进一步说明质体的sigtaa类似因子与细菌sigma70因子在 功能上具有一定的可替代性。因而通过研究细菌sigma70因子在高等植物叶 绿体中对质体基因袁达的影响，一方面可为探索质体基因表达调控的机理提 供证据，有助于叶绿体基因工程构建高效表达载体；另一方面也可从进化的 角度探索叶绿体基因与细菌基因之问的相互识别。 基於以上的证据，我们从大肠杆菌Ecol，中克隆了，p加基因，并在其 起鲐密码子前连接上矮牵牛的定位于叶绿体的导太基因序列，这样在细胞中 表达的sigma70融合蛋白可进入叶绿体内。经农杆菌介导的植物细胞核转 化，上述基因被整舍到烟草植物基因组中。Southern杂交显示在不同的转 化株系中，rpoD基因插入到植物细胞核的不同住点，且插入拷贝数也不尽 相同。Northern杂交进一步表明与多拷贝插入相比，单拷贝插入基因的表 达量要略高。以该转基因植物为材料，我们进一步分析了rpoD基因的表达 对叶绿体内源基因表达的影响：以野生型烟草作为对照，psbA基因的表达 在rpoB转基因植物的绿叶和根中均未有明显的变化，而c，妒的mRNA水乎 在根内有轻微的降低，这与拟南芥s冶?突变体中观察到的结果相符。叶绿 psbA基因表达的影响被其高水平的mRNA所遮盖。sigma70对光合作用基因 表达的总体影响在根内可能更明显，并反绩到持家基因的表达，造成根内 clpP表达的轻微降低。结合已有的研究结果，我们认为光合作用基因与持 家基因的表达存在着相互反馈作用，且质体转录激酶(PTK)介导的RNA聚合 酶及sigma类似因子的磷酸化可能起关键作用。这些均暗示着质体基因的表 达要比原先预想的复杂得多。叶绿体trcGFP转基因烟草与rood转基臣．趄草 之间的杂交正在进行之中，通过观察GFP表达水平的变化可为叶绿体和细菌 转录系统之阍的相互识剐提供更多的信息。 关键词：烟草 叶绿体 细菌 rpoD基因5igma类似因子 一2一 1 Introduction 1．1Bacterial factorofactors transcriptional The bacterialcoreRNA consists offivesubunits polymerasecomplex，which sufficientfor and terminationbutisunable (Bp乜∞)，is transcriptionelongation to initiate initiationfrom elements a transcription．Transcription promoter requires subunitcalle