丝状真菌三孢布拉霉DNA的提取研究.pdfVIP

维普资讯 第 u卷第 3期 生 物 技 术 Vo1．1L，No．3 2001年 6月 B衄 CHNOLOGY Jun，2001 shortfledblepeptidech n thsixlt／llJ／lOacid8．fomaingafusionprotein．1hj8fusionproteingeneJ1a8a coding1,~gion —1830baseDa船． encoding609~rainoaeidsandatemfinatorcodeA． e t 0fpro- reinanalysis(An山e舯 ．3，Pr0Bi8v5．0o)w蚰u ，硒ul shOWthatthefusionproteinkeep~ph eal andchemicalehm~actersasgoodasthe I1且ltwopreteir~andmaintai128thee88entialsecondmy~IlllC- tutrt~0fthesetwoproteins． 吧 n】antexpressionPBI／Gtlvectorw舾 cor~lruetedby cloningthefusion ge|letoPBI121ola~ d． Keywords：8—1，3一glueana~ ；ribos叫1e—inaetivatln~protein；fusiongene 中圈分类号 ：o5∞ ．1 文献标识码：A 文章编号 ：1004—3l1x(2001)∞一0005一∞ 丝状真菌三孢布拉霉 DNA的提取研 究 单志萍 ，孟好 ，姜文侯 (江苏省微生物研究所 ，江苏 无锔 214063) 播 三孢布拉霉 DNA。用 100~1Tfis·ttel；4On州 EIYrAⅢ{9．0；2％sDs作为提 取液 三孢布拉霉细胞壁中的多糖成分发生反应 ，从而达到破坏细胞壁结构 ， 释放 DNA污染少，质量高。 关键词：丝状真菌；三孢布拉霉；DNA；提取 DNA的提取、分离及纯化是基因工程 中 14 DNA提取方法 一 项基础的工作。尽管从丝状真菌中提取的 1．4．1 菌体的获得 ：28℃培养好 的孢 子接种 DNA的方法 已有大量报道_l-3J，但太部分是 于液体培养基 中。180r／rain，28℃，振荡培养 利用液氮研磨及酶解破坏细胞壁 的方式，存 44h。取 20ml培养好的菌液于无菌试 管 中， 在诺多弊端，如提取工艺繁琐 、成本高。三孢 2O00r／mln离心 1OIIlin，保留菌体，用无菌水洗 布拉霉的菌体较大，细胞壁 中富含多糖…，用 涤 2次，再用无菌滤纸吸干水份 ，置于试管中 液氯研磨法难 以完全地抽提 出 DNA。为此 备用。 一 ． 我们采用一种新的方法一氯化苄提取三孢布 1．4．2 采用氯化苄提取 DNA…：将置有菌体 拉霉的DNA，得到令人满意的结果。 的试管中加入 5ml提取液 ，剧裂振荡使其混 匀，再加入 1wJ10％ SDS和 3wJ氯化苄原液 。 1 材料与方法 剧烈振荡使其混匀，50℃保温 1h，每 隔 10min 振荡 混 匀 1次。再 加 入 3Ⅱd3M N~DAe 1．1 菌种：三孢布拉霉 (Blat~MeatM~pora) ( ．2)，将 试 管放 在 冰 水 中 15 n，室温