免疫性生精障碍动物模型的建立及其发病机制的探讨.pdfVIP

◇t．．皇．}。蔓 免疫性生精障碍动物模型的建立及其发病机制的探讨 中文摘要 睾丸的酒精提取物和精液提取物，加入灭活的分枝杆菌或佐剂，以刺激机体免疫细 胞识别大鼠睾丸抗原，激活免疫系统，促使免疫系统攻击自身的睾丸抗原，睾丸内 的抗原物质暴露于免疫活性细胞，诱发了局部的免疫炎症反应，从而抑制精子成熟 和各级精子的生成，诱发豚鼠睾丸无精症的发生，其无精状态自注射后10天开始持 续5个多月，其结果最终导致曲细精管萎缩和纤维化。还有学者使用环磷腺胺，白 消安等化疗药物耗竭精原干细胞导致无精症；利用一侧睾丸的外伤方法模拟人类睾 丸外伤后，造成外伤性免疫性睾丸炎而致不育的动物模型，或者化学物质如冰醋酸 的刺激诱发对侧“交感性”睾丸炎的发生诱发免疫性睾丸炎等等。但是对于反复感 染造成的血睾屏障的破坏而导致的不育不能很好模拟。既往的研究认为不同种系小 鼠建模造成生精功能低下的情况相差甚远，我们的实验着重研究了纯系的BALB／c小 鼠的免疫性生精障碍模型的建立。 在一系列的男性生殖环节中，睾丸精子的发生是最根本的环节。生精细胞包括 精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。正常睾丸生精功能的 维持，血睾屏障起了重要的作用，通常情况下曲细精管壁上的Sertoli细胞紧密连 接形成的血睾屏障将生精细胞和精子与免疫系统隔绝，不诱发免疫反应。对于个体 来说精母细胞，精子细胞，精子均属于隐蔽抗原。由于血睾屏障的保护，这些抗原 不能与机体的免疫系统接触，所以无从发生自身免疫。一旦血睾屏障破坏，隐蔽抗 原暴露，则发生自身免疫反应，诱发睾丸炎进而可以导致不育。已经表明，在此过 Hlor 70，hnRNPODF一2，MCP一1／CCL2，TNF 程中，IL一6和IL一6R，lisp Q等因子甚 性生精障碍发病中的作用却鲜有研究。 小鼠的原癌基因c—kit在造血、配子发生和／或黑素发生方面起重要作用。该基 因编码的c—ki t受体是一种酪氨酸蛋白激酶受体，和其配体干细胞因子(scF)结合后 在配子形成过程中起重要作用。研究表明，c-kit受体在精原细胞的分化过程中阶段 性的表达，是精原细胞进行分化的重要条件，c—kit的存在维持了精原细胞的增殖， 那么在机体免疫性生精障碍发生时，c—kit的变化情况如何呢? 本研究通过比较同种、异种睾丸匀浆在添加或不添加免疫佐剂的情况下，作为 抗原模仿反复感染对机体的刺激，利用BALB／c小鼠建立免疫性生精障碍动物模型。 并对原癌基因c—kit mRNA在免疫性生精障碍模型中的表达进行研究，以期能进一步 ¨ ◇i．．皇亳t謦 免疫性生精障碍动物模型的建立及其发病机制的探讨 中文摘要 探讨免疫性生精障碍的可能的发病机制。从而为研究不育症的发生提供一种新思路。 研究内容及方法 1． 免疫性生精障碍动物模型的探索 1．1实验动物分组和方法 雄性BALB／c小鼠，体质量35--409，共100只。 组1 20只，注射BALB／c小鼠睾丸混悬液。每周1次，共4次。 组2 20只，注射BALB／c小鼠睾丸混悬液加入完全免疫佐剂。每周1次，共4 次。 组3 25只，注射l(M小鼠睾丸混悬液。每周1次，共4次。 组4 25只，注射KM小鼠睾丸混悬液加入完全免疫佐剂。每周1次，共4次。 组5(对照组)10只，注射无抗原的HBSS。每周1次，共4次。 1．2观察方法 于第一次抗原注射后第5，8，11周分批取材，每批5只小鼠的睾丸和附睾。对 照组5与实验组同步取材，每批3只小鼠的睾丸和附睾。以睾丸组织制成常规石蜡 碍的分级病理诊断。观察附睾尾精子数、存活率、活动率，附睾尾精子参数检测。 雌雄台笼，观察受孕情况，推算受孕时间。 2．免疫性生精障碍动物模型的分析(组3’) 2．1BALB／e小鼠免疫性生精障碍模型的制备 BALB／c小鼠42只，注射KM小鼠睾丸混悬液。每周1次，共4次。 2．2实验检测指标 在第一次给予抗原注射后一，二，三