抗软海绵酸单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建.pdfVIP

抗OA的抗体。 3。缨憝融合与选撵培养 将免疫后的小鼠牌淋巴细胞与骨髓瘤细胞P3X63一Ag．8．653 glycol，PEG)的作殿下进行融合，融合后 在聚乙二醇(Polyethylene 培养液进行选择培养。 毒．杂交瘩细胞豹筛选与巍隆 以OA—OVA为抗原，用EMSA测定培养上涛中扰OA的揽体， Dilu， 将抗簿耀牲缨脆魏鳃杂交瘤缨施按照有限稀释法(Limiting tion Method)进行克隆，再用ELISA检测培养上清中分泌抗OA的 McAb，赢裂瑟礴缀骢魏麓培养上溥均为器睦舅正。 5．杂交瘸细胞的扩大培养与冻存 将撬俸瓣接较强童生长氮睁鳇杂交瘗缨拣继续扩夫墙莽，姿 细胞达到一定数量后将细胞冻存起来。 6。统计方法 小鼠血清巾抗OA抗体的测定结果用方差分析进行统计。 结 果 I。撬嚣翡麟备 用碳化二_溉胺偶联法成功地将微爨半抗／g OA制成了完念抗 藤OA—BSA蠹OA—OVA，著将OA—BSA捧秀免疫蹑免疫动豹，将 OA-OVA作为检测用抗原。 2。受疫效皋 用抗原OA”BSA免疫两只BALB／c小鼠，经5次小剂量11周 免疫后，NNA,飘50倍鞭200傣稀释斑溥串均产生了挽0A的撬 体。 3．细胞融合与杂交瘤缨瓞筛选 ·2· 绥臆惑会詹，初次筛选有549个巍出浚克隆，尧隆出褒率为 30．1％，其中阳性克隆为9孔，克隆阳性率为1．6％。 筹1次壳隆酶6块板孛，第2．4、5获摄分别意29、30蠢弱个 孔出现细胞克隆，这贱细胞孔的上清液经ELISA检测后分别有 ll、12荦鞋lo个强中抗体呈现阳性反应，克隆阳性枣分别努37。 9％、40．o％和38．5％。其余3块板最然有细胞生长，但培养上清 中的抗体全部为阴性。 第2次克隆的每块板中均有细胞克隆生长，克隆阳性率不同， 其中第2、5、6块板克隆阳性搴分别为100％、100％和96。7％。 第3次壳隆的3块板中分别有14、34和13个孔中有壳隆生 长，克隆孔的上清液经ELISA检测后企部为阳性，克隆阳性率均 秀100％。 经过3次克隆后，获得了3个分泌抗OA单克隆抗体的杂交 瘤缨瓞株。～j． 续 论 本研究利用碳化二亚胺法成功地将微量半抗原OA与大分子 载体蛋白BSA和OVA偶联起来。并用OA-BSA作为免疫原小剂 量长周期刺激小鼠的免疫系统，使小鼠血清中产生了抗OA的抗 体。 利用B淋融细胞杂交瘤技术，将小鼠骨靛瘤细胞和脾细胞成 瑰遵融合在一起，经过选择培养_穗克疆芘培养焉筛选滋了3株分 泌抗OA单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这为我国今膳建立快速、 灵敏、经济懿软海终酸ELISA捻溅方法撂下了坚实静鐾凄基礁， 也为其它贝毒豢检测方法的研究提供了可借鉴的经验。 关键词：赤濑藻毒索；软海绵酸；单竞窿抗体 ·3· strains monodonal of cell secreting Preparationhybridoma okadaicacid an廿bodi嚣against Abstract Objective of strains cell monoclonal Preparation