第十一 章 植物、动物基因工程.pdf

第十一章:动植物基因工程 • 植物基因工程 • 动物基因工程 一、植物基因工程 • 依据植物细胞全能性 • 对单个细胞改造即可再生完整的转基因植株 • 转基因植物可以遗传 （一）植物基因转化的方法 1、农杆菌的Ti质粒载体 • 农杆菌是植物病原菌 • 携带Ti质粒 • 质粒上一段DNA称为T-DNA （Transfer-DNA) • 能转移并整合到植物基因组中 2 、基因枪 • 目的基因用金粉或钨粉包裹成直径1~4 μm颗 粒，再利用基因枪以火药爆炸或压缩氦气为动 力将DNA颗粒以300~600m/s 的速度打入植物细 胞。 （二）植物抗病的分子机理 1、植物的抗病反应 • 非寄主抗性：病菌只对某种植物有作用—轮作 • 结构屏障：细胞壁、角质层、蜡质、木质化 • 诱导抗性：产生防卫反应，糖蛋白、抗毒素等 2 、抗病基因的克隆 目前已克隆了16个抗病基因如： • 玉米的HmI基因：对Cochliobolus真菌的抗性 • 番茄Pto基因:对avrpot病菌的抗性 • 拟南荠Rps2基因：对avrRpt2病菌抗性等。 3 、杀菌肽 • 能够起到杀菌作用的多肽 • 许多昆虫中具有这样的多肽 • 能够破坏细菌的细胞膜，造成离子通道，导致 细胞内含物泄漏。 杀菌肽的特点 • 由30多个aa组成 • N端由碱性aa残基组成 • C端酰胺化 • 多数第二位为Trp • 对植物病原菌有强的和广谱的杀伤作用 杀菌肽基因工程 • 人工合成杀菌肽基因 • 转入植物体中 • 获得抗性品种 （三）抗性品种的培育 1、抗虫植物 • 苏云金杆菌毒蛋白（Bt toxin ）基因 苏云金杆菌孢子能产生伴孢晶体蛋白，也称为 杀虫晶体蛋白或Bt毒蛋白。通过人工改造合成 的Bt毒蛋白基因，对棉铃虫等有强的毒杀作 用。 苏云金杆菌毒蛋白（Bt toxin ）基因 • 图 1. Insect eats Bt crystals and spores. 2. The toxin binds to specific receptors in the gut and the insects stops eating. 3. The crystals cause the gut wall to break down, allowing spores and normal gut bacteria to enter the body. 4. The insect dies as spores and gut bacteria proliferate in the body. • 蛋白酶抑制剂基因 产生的蛋白酶抑制剂，能抑制昆虫的消化酶， 抑制植物蛋白的水解，使昆虫产生厌食反应， 最终导致昆虫的死亡。 • 外援凝聚素基因 产生的外源凝集素被昆虫摄食，可与肠道粘膜 上的糖蛋白结合，影响营养物质的吸收，还可 以诱发消化道病灶对昆虫造成危害，达到杀虫 的目的。 2 、抗病毒植物 • 病毒侵染植物的主要过程 • 脱外壳蛋白 • 病毒蛋白的翻译 • 病毒基因组的复制 • 病毒颗粒的包装 • 外壳蛋白介导的抗性 转入外壳蛋白基因，产生的外壳蛋白可以封闭 病毒侵染植物的脱壳过程，使病毒核酸无法进 入植物。 • 反义RNA介导的抗性 将互补的病毒外壳蛋白mRNA 的anRNA转入植 物，可阻碍病毒复制获得抗病毒的转基因植 物。 3 、抗除草剂植物 • 草甘膦是一种对环境无害的除草剂，功能是抑 制5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶 （EPSPS ），在大肠杆菌中有EPSPS酶基因， 转入植物可以代替自身被抑制的酶起到抗草甘 膦的作用。 二、动物基因工程 • 外源基因转入受精卵细胞核中 • 移植到雌性受体的子宫 • 胚胎发育成后代 • 部分后代带有转入基因 • 培育纯合系 1、嵌合体动物（chimera mosaic