模拟失重对大鼠骨折愈合的实验研究.pdfVIP

14天取材；对照3组(G)：骨折形成后动物自由活动2l天取材；对 照4组(H)：骨折形成后动物自由活动28天取材。各组研究对象 年龄、体重、性别、营养状态匹配。 首先建立大鼠骨折模型：麻醉方法采用氯胺酮ketamine和 846液，注射途径采用腹腔内注射。手术方法是随机选择大鼠的 单侧后肢(左或右)，将大鼠单侧腓骨中段用剪刀剪断，再缝合伤 口，完成骨折模型的建立。然后建立骨折大鼠失重模型：在麻醉状 态下，将大鼠尾部使用氧化锌胶布固定在鼠笼顶壁，上肢可活动并 触及笼底。鼠与鼠之间及鼠与笼壁间保持足够的距离以免影响头 低尾悬吊模型的建立。常规喂养并定期检查及清理。最后使用颈 部折断法处死大鼠，按病理科要求取得腓骨标本并固定。使用二 步法免疫组化检测BMP。同时行透射电镜观察标本。 实验结果 一、免疫组化的定量标准：随机选取10个高倍镜视野，平均阳 性细胞10个，定为阴性(一)；平均阳性细胞10～50，为阳性 (+)；平均阳性细胞50个，为强阳性(++一卅)。 1．A组与E组相比，X2=1．640(P0．05)，无显著性差异。 异。 差异。 差异。 二、光镜、电镜病理结果： 实验组与对照组相比，骨折早期及晚期的愈合明显延迟。 ·2· 讨 论 失重是身体任何部分或者系统之间没有压力差，它引起骨一 肌肉形态重力负荷的消失。失重对骨骼的影响是：l，骨膜生成受 抑制，在胫骨干骺端较明显。2．出现生长停止线。3．干骺区成骨 细胞数目减少。骨的变化主要是由于代谢和功能负荷水平的改变 引起。BMP是一种与骨细胞分化有关的酸性蛋白，分子量 BMP能够诱导血管周围问充质细胞分化为软骨细胞和骨细胞，从 而诱导骨形成。BMP可由成骨细胞产生并主要与骨基质结合，很 少释放到骨外。BMP的主要生物学作用是诱导未分化的间质细 胞分化形成软骨和新生骨，还能增加AKP活性和胶原合成。 在飞行大鼠骨折愈合的影响研究中发现骨折愈合被抑制，骨 痂形成甚少，碎骨片不能被充分固定，类骨质相对容量上升，以及 与其共存的成骨细胞数量和功能下降，导致失重状态下新形成骨 的矿物质紊乱。对已骨折的腓骨和未骨折的胫骨的分析显示，真 空失重状态下或尾部悬吊状态下14天可产生相似的变化。后肢 悬吊亦称头低位悬吊或尾悬吊，是一种消除后肢负荷以模拟空间 微重力环境的方法。头低位倾斜被认为是继研究人员发现在模拟 人在微重力下的情况中头低位卧床比水平卧床要好之后的理想方 法。在这类研究中观察到的生理变化和体液移动改变类似于航天 员在空间飞行期间发生的变化。除此之外，头低位定向允许研究 人员在悬吊动物时使其前肢保持与”地面”的接触，而后肢被随意 悬吊。这种姿势可使研究深入到长期去负载对承重骨和与运动和 状态相关的骨骼生理和形态的影响。目前，大鼠头低尾部悬吊的 动物模型是较为理想的模拟失重的动物模型。 有研究显示太空飞行期间骨折愈合拖延。本实验发现尾吊组 ·3· 骨质和骨膜中阳性着色明显弱于对照组，且骨髓细胞中BMP一2 的含量也降低，随着尾吊时间的延长越来越明显。提示去负荷后 BMP合成受抑制，从而抑制BMP诱导的细胞分化过程，成骨细胞 数量减少，BMP含量减少，最终抑制骨形成。去负荷时间越长，成 骨细胞数量和BMP含量越少，骨形成受抑制越明显，进而引起失 重性骨丧失。大，∥一 结 论0 1．模拟失重状态对后肢骨折大鼠骨折愈盒过程有延迟作用。 ’eI●●●■●■●_一 2．模拟失重状态持续的时间越长，则对后肢骨折大鼠骨折愈 合过程有越明显的负面影响。 关键词：模拟失重；骨形成蛋白；透射电镜；段 ·4· Jianguo Postgraduate：Si Fan