米帕明对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用论文.docVIP

　　米帕明对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用论文 许勇 姬汴生 石乐鸣 刘红 张贵卿 【关键词】 米帕 【摘要】 目的 研究米帕明(Imi)对谷氨酸损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用。方法 分离培养15～１８ ｄ胎龄的大鼠神经细胞，加入谷氨酸(Glu)，观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及米帕明的保护作用。结果 加入谷氨酸后，神经细胞出现明显损伤性变化，死亡率升高，培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量增加，细胞匀浆中丙二醛(MDA)生成增加，超氧化物歧化酶(SOD)含量明显减少。Imi能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论 Iｍｉ对谷氨酸所致的神经细胞损伤具有保护作用.freelipramine (Imi) on glutamate-induced neurotoxicity in cultured rat cerebral cortical neurons.Ｍethods Cortical neurons of fetal of rat i on glutamate-induced neurotoxicity edium developed a neurotoxicity expressed in the increase of LDH leakage and NO,MDA content and the decrease of activity of SOD,as ent of morphological injury.Imi protected neurons against above damage significantly.Ｃonclusion The results suggest that Imi prevents the toxicity of Glu.And it maybe attribute to its effect of anticalcium. 【Ｋey ipramine,glutamate,cerebral cortical neurons,cell culture 缺血性脑血管病是临床常见疾病，对其发病机制人们提出了多种学说，如钙超载学说、兴奋毒性学说、自由基学说等，其中兴奋毒性学说早已为人们所重视。谷氨酸(glutamate,Glu)是中枢神经系统内含量最高的兴奋性氨基酸，而几乎所有的神经细胞都有谷氨酸受体，因此任何引起胞外谷氨酸浓度异常增高的病理变化均会产生兴奋毒性。有研究发现［１］，米帕明(ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ，Ｉｍｉ）具有钙拮抗作用，对兔基底动脉有选择性舒张作用，因此考虑该药可能有脑保护作用。本研究利用培养大鼠皮层神经细胞，建立谷氨酸损伤模型，观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及研究Iｍｉ是否具有保护作用，并探讨其可能的作用机制。 １ 材料与方法 １．１ 材料 TT)均为Sigma公司产品；DMEM高糖培养基、胎牛血清、马血清均为Gibco公司产品；盐酸阿糖胞苷为上海华联制药有限公司产品，批号990901；乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒均为南京建成生物工程研究产品；总蛋白试剂盒为北京中生生物工程高技术公司产品。其余试剂均为市售分析纯。HERA cell二氧化碳培养箱(德国GmbH公司)；SEM培养基中，剔除软脑膜和血管，将脑组织移入含血清的DMEM培养基(含10%胎牛血清和10%马血清)的小烧杯中，用细口吸管反复轻轻吹打成细胞悬液，以200目不锈钢筛网过滤，并将滤液细胞数调至1×１０６个 ｍｌ－１，接种于经0.01%多聚Ｌ-赖氨酸过夜处理的细胞培养板中(24孔板接种1ｍｌ 孔－１，96孔板接种0.1 ｍｌ 孔－１)，置37℃、５％CO２培养箱中培养。次日待细胞贴壁后换液1次并去除死细胞，以后每3～４ d换液1次。细胞培养至第6天时，加入终浓度10 μ ｍｏｌ Ｌ－１阿糖胞苷以抑制非神经细胞的生长，18 ｈ后换新的DMEM培养基继续培养。 １．２．２ Glu对神经细胞的损伤［３，４］：取培养12～１４ ｄ的神经细胞，吸去原培养液，用无Ｍｇ２＋Ｅarlie液［(ｍｍｏｌ Ｌ-１）：ＮaCl 143，ＫＣl ５.４，ＣａＣｌ２１.８，ＮａＨ２ＰＯ４１.０，葡萄糖5.6，ＨＥＰＥＳ ２.４，ｐＨ ７.４］洗2遍，每孔加入含Glu终浓度5×１０－４ｍｏｌ Ｌ－１的无Mｇ２＋Ｅarlie液1 ｍｌ(24孔板)、０.１ ｍｌ（９６孔板)，15 ｍｉｎ后用DMEM培养基洗去Glu,再换用无血清的DMEM培养基，置37℃、５％ＣＯ２培养箱中继续培养24 ｈ。正常对照组不加Gｌｕ，其余处理同上。给药组在损伤处理前24 ｈ及处理过程中均加入不同浓度的Iｍｉ。 １．２．３ MTT微量自动比色［５］：Ｇlu损伤细胞