第08章 气体成分分析 高效液相色谱法.ppt

高效液相色谱法 8-1-01 高效液相色谱 8-1-02 高效液相色谱的类型 8-2-01 液相色谱仪器 8-2-02 输液泵 8-2-03 输液泵 8-2-04 活塞型往复泵 8-2-05 脱气装置 8-2-06 梯度脱气装置 8-2-07 进样器 8-2-08 色谱柱 8-2-09 数据处理系统与自动控制单元 8-3-01 液相色谱分离模式 8-3-02 分配色谱 8-3-03 凝胶色谱 8-3-04 离子色谱法 8-4-01 液相色谱检测技术 8-4-02 紫外-可见光（UV-VIS）检测器 8-4-03 示差折光检测器 8-4-04 荧光检测器 8-4-05 电导检测器 8-4-06 蒸发光散射检测器 8-5-01 其它色谱方法 8-5-02 毛细管电泳和毛细管电色谱 8-5-03 亲和色谱 8-5-04 激光色谱 8-6-01 液相色谱的应用 8-6-02 液相色谱分离模式的选择 概述 （一）高效液相色谱的发展 液相色谱法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）发明的，此之前纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。 20世纪60年代后期，液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。 液相色谱法于1969年商品化。这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。　　 高效色谱的类型 HPLC按分离机理的分类 液相色谱仪器 输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。图8-1 输液泵? 　◆流量准确可调。对于一般的分析工作而言，流动相的流 速在0.5-2mL/min，输液泵的最大流量一般为5-10mL/min。输液泵的流量控制精度通常要求小于±0.5%。　　 ◆耐高压。通常要求泵的输出压力达到30-60MPa的高压。　　 ◆液流稳定。输液泵输出的液流应无脉动，或配套脉冲抑制器。　　 ?　　 ◆ 泵的死体积小。为了快速更换溶剂和适于梯度洗脱，泵的死体积通常要求小于0.5mL。泵的结构材料应耐化学腐蚀。 ▲输出液恒定的因素 　　●单活塞往复泵： 在活塞柱的一端有一偏心轮，偏心轮连在电动机上，电动机带动偏心轮转动时，活塞柱则随之左右移动。在活塞的另一端有上下两个单向阀，各有1-2个蓝宝石或陶瓷球，由其起阀门的作用。 ▲下面的单向阀与流动相连通，为活塞的溶液入口； ▲上面的单向阀与色谱柱相连，为活塞的溶液出口。 ▲ 活塞向外移动时，出口单向阀关闭，入口单向阀打开， 溶液（流动相）抽入活塞缸。 ▲活塞向里移动时，入口单向阀关闭，出口单向阀打开，流动相被压出活塞缸，流向色谱柱。图8-2 有一个精心设计的偏心凸轮，用同步电机或变速直流电机驱动偏心凸轮，偏心凸轮再推动两活塞作往复运动。偏心凸轮短半径端对应的活塞向外伸，使该活塞的下单向阀打开吸入流动相，同时，半径端所对应的另一活塞被推入，使其上单向阀打开，并将流动相送至色谱柱。两活塞交替伸缩，往复运动，这样避免单活塞泵液流脉冲的问题。?　　　　 不必使用消除脉冲的阻尼器，避免了阻尼器的压力消耗，但缺点是设备成本较高，流量调节也比单活塞泵复杂。 图8-3 　　隔膜型往复泵也是一种恒流泵，一块隔膜将泵缸分为两部分，一部分充满了油，另一部分充满了流动相。活塞与油接触，当活塞往复运动时，隔膜受到油压的作用，对流动相部分产生“吸引”或“推压”，使流动相部分的单向阀吸液或排液，从而获得稳定的液流。通过调节泵活塞的冲程即可进行流量调节。　　隔膜泵的活塞不直接与流动相接触，故不存在活塞密封垫磨损对流动相的污染。隔膜泵的死体积小（约0.1mL），因此，更换流动相后平衡快，有利于梯度洗脱。隔膜泵的缺点是结构比较复杂，价格较贵，和单活塞机械往复泵一样，也产生脉冲，也需要配置阻尼装置来