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第一节 dna的生物合成(5-13-1)
2. 复制眼的形成 由于复制原点都是在DNA分子的内部,而不是在末端,所以当复制启动后需要在复制原点处将DNA双螺旋局部解链,形成“眼状”结构 —— 复制眼。? (五)复制的过程 一.DNA的复制 复制眼的结构:? 复制眼形成后,其两端的叉子状结构称为复制叉。 2. 复制眼的形成 (五)复制的过程 一.DNA的复制 2. 复制眼的形成-双螺旋解开的过程 解螺旋酶使DNA双螺旋局部解链; SSB结合到解开的单链上; 拓扑异构酶Ⅱ向DNA中引入负超螺旋,以消除由解链产生的扭曲张力(动画)。? (五)复制的过程 一.DNA的复制 (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进 (1) 复制叉推进的方式 随着复制叉的推进,两条新链的合成方向是不同的: 一条链延伸的方向与复制叉前进的方向一致,它的合成能连续进行,称为前导链; (五)复制的过程 一.DNA的复制 另一条链延伸的方向与复制叉前进的方向相反,它显然不能被连续合成,需要复制叉推进了一定的长度,有了一段DNA单链后,才能以此为模板合成一个片段。因此这条新链的合成是不连续的,而且总晚于先导链,所以称为随后链。 (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进-复制叉推进的方式 这种前导链连续合成,随后链断续合成的方式,称为半不连续复制。 随后链中合成的多个DNA片段,称为冈崎片段。冈崎片段的长度原核细胞中约1000~2000个核苷酸,真核细胞中约100~200个核苷酸。? (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进-复制叉推进的方式 引物酶在复制原点附近合成一段RNA引物; DNA聚合酶Ⅲ (原核细胞)在引物的3'末端逐个添加脱氧核苷酸。 随着复制叉的推进,亲代DNA双螺旋不断被解开,先导链也不断延伸。? ① 先导链的合成 (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进-复制叉推进的过程 ② 随后链的合成 引物的合成:随后链的每个冈崎片段都需要合成 RNA引物。也是由引物酶催化。? 冈崎片段的合成:DNA聚合酶Ⅲ(原核细胞)在引物的3'末端使DNA链延伸,直至抵达其下游的另一个冈崎片段的RNA引物的5'端。 (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进-复制叉推进的过程 ② 随后链的合成 冈崎片段的连结:DNA聚合酶Ⅰ一面以其DNA聚合活性在上游冈崎片段的3'-OH末端添加脱氧核苷酸,一面以其5'→3'核酸外切活性切除引物,直至将引物全部切除。 DNA连接酶将最后的缺口补好。 (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进-复制叉推进的过程 ③ 先导链和随后链中DNA的延伸由同一个DNA聚合酶Ⅲ全 酶二聚体催化 随后链的模板回折成环,从而使冈崎片段的延伸方向与先导链的延伸方向一致,它们的3'末端分别落在DNA聚合酶Ⅲ全酶的双活性部位。因此,随着聚合酶的移动,两条链同时延伸。 (五)复制的过程 一.DNA的复制 3.复制叉的推进-复制叉推进的过程 第一节 DNA的生物合成 一. DNA的复制 复制部位: 真核生物:细胞核 原核生物:细胞质的核质区 (一) 复制的反应 n1d ATP n2d CTP n3d GTP n4d TTP DNA聚合酶 DNA模板 DNA +(n1+n2+n3+n4)PPi PPi随即被焦磷酸酶水解,从而推动聚合反应的进行。 一. DNA的复制 (二) 复制的方式 DNA复制时,亲代DNA的双螺旋先解旋并分开,然后以每条链为模板,按照碱基配对原则,各形成一条互补链。这样,从亲代的一个DNA双螺旋分子复制成两个与亲代的碱基序列完全相同的子代DNA分子。每个子代DNA分子中,有一条链来自亲代DNA,另一条则是新形成的,这样的复制方式叫做半保留复制(semiconservative replication)。 半保留复制 一. DNA的复制 半保留复制 (二) 复制的方式 一. DNA的复制 如何证明半保留复制 (二) 复制的方式 一. DNA的复制 1958年,Meselson 证明:用,15NH4Cl唯一氮源培养大肠杆菌,之后,用14NH4Cl培养,然后进行CsCl2进行密度梯度离心。由于15NH4Cl密度大于14NH4Cl,因此,形成不同区带,经过若干代培养后,两个14NH4Cl区带增多。 (二) 复制的方式 一.DNA的复制 半保留复制 全保留复制 (三) 复制反应注意点 DNA复制除入DNA聚合酶, DNA模板, dNTP外,还需要多种蛋白质因子、引物、Mg2+等. 一. DNA的复制 特点: A 对利福平不敏感 B 核糖核酸代替脱氧
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