第三章 高效液相色谱分析法2.ppt

第三章高效液相色谱分析法 一、高效液相色谱仪 二、高效液相色谱法的特点 三、流程及主要部件 一、液相色谱仪器 二、高效液相色谱法的特点 三、流程及主要部件 2.主要部件 (2) 梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 紫外阵列检测器 B. 示差折光检测器 C. 荧光检测器 第三章高效液相色谱分析法 一、液-固吸附色谱 二、液-液分配色谱 三、离子交换色谱 四、离子色谱 五、离子对色谱 六、排阻色谱 七、亲和色谱 一、液-固吸附色谱 二、液-液分配色谱 三、离子交换色谱 四、离子色谱 五、离子对色谱 六、空间排阻色谱 七、亲和色谱 第三章液相色谱分析法 一、液相色谱固定相 二、液相色谱流动相 一、液相色谱固定相 （3）化学键合固定相 化学键合固定相的特点： 2.液-固吸附色谱固定相 3.离子交换色谱固定相 4. 空间排阻色谱固定相 二、液相色谱的流动相 1. 流动相类别 2. 流动相选择 3. 选择流动相时应注意的几个问题 第三章液相色谱分析法 一、影响分离的因素 二、分离类型的选择 三、液相色谱的应用 四、液相制备色谱 一、影响分离的因素 2.流速 二、分离类型选择 三、HPLC的应用 2. 稠环芳烃的分析 四、制备型液相色谱 2. 液相制备色谱的方法 3. 制备型液相色谱 第三章液相色谱分析法 一、高效毛细管电泳法原理 二、高效毛细管电泳的特点 一、高效毛细管电泳法原理 带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在正离子后流出； 负离子：两种效应的运动方向相反。 ν电渗流 >ν电泳时,负离子在负极最后流出 在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。 高效毛细管电泳分析 二、高效毛细管电泳的特点 （1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、甲醇 、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小) （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 第四节影响分离的因素与操作条件的选择 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。