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第二章 酶的发酵生产 第一节 酶生物合成的基本理论 一、中心法则 二、RNA的生物合成——转录 （二）转录 （三）RNA聚合酶 （四）转录的起始 （六）转录的终止 （七）RNA前体的加工 二、蛋白质的生物合成——翻译 第二节 酶的生物合成法生产 一、基本概念 酶的生物合成：所有的生物体在一定条件下都能够产生多种多样的酶。酶在生物体内的产生过程，称为酶的生物合成。 酶的生物合成法生产：经过预先设计，通过人工操作控制，利用细胞（包括微生物细胞、植物细胞和动物细胞）的生命活动，产生人们所需要的酶的过程。 二、酶的生物合成法生产种类 优良的产酶细胞应具备的条件 1.繁殖快,产酶量高，有利于缩短生产周期。 2. 能在便宜的底物上良好生长。 3. 产酶性能稳定，菌株不易退化，不易受噬菌体侵袭。 4. 产生的酶容易分离纯化。 5. 不是致病菌及产生有毒物质或其他生理活性物质的微生物，才能确保酶生产和应用的安全。 1. 大肠杆菌 2. 枯草芽孢杆菌 3. 链霉菌 四、产酶菌种的筛选方法 胞内酶：含菌样品的采集→菌种分离→产酶性能测定→复筛 五、酶的发酵生产方式 1.固体培养发酵 2. 液体深层发酵 3. 固定化细胞 4. 固定化原生质体发酵 第四节 发酵工艺的条件及控制 一、细胞活化与扩大培养 二、培养基的配制 三、pH调节 四、温度的调节控制 五、溶解氧的调节控制 六、微生物产酶的方式及特点 七、提高酶产量的措施 八、酶发酵动力学 （二）各种酶生物合成模式的特点 第五节 动、植物细胞发酵产酶 一、动植物细胞的特点 二、植物细胞发酵 （二）植物发酵产酶的工艺条件控制 三、动物细胞的发酵 动物细胞连续培养 微生物发酵产酶 植物细胞培养产酶 动物细胞培养产酶 特征： 细胞成杆状，0.5μm*（1~3） μm，无芽孢，G-，菌落从白色到黄色，光滑闪光，扩展。 产酶种类：一般生产胞内酶 谷氨酸脱羧酶，天冬氨酸酶，苄青霉素酰化酶，基因工程研究用酶等 三、酶发酵生产常用的微生物 特征： 细胞成杆状，（0.7~0.8）μm*（2~3） μm，单个，无荚膜，周生鞭毛，运动，G+，菌落粗糙，不透明。污白色或微带黄色。 产酶种类： α-淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、碱性磷酸酶等 特征： 最高等的放线菌。有发育良好的分枝菌丝，菌丝无横隔，分化为营养菌丝、气生菌丝、65孢子丝。孢子丝再形成分生孢子。孢子丝和孢子的形态、颜色因种而异，是分种的主要识别性状之一。 产酶种类： α-淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、碱性磷酸酶等 4. 黑曲霉 特征： 属于半知菌亚门, 菌丝有隔,细胞多核；部分气生菌丝细胞形成特化的厚壁、膨大的足细胞，由足细胞的中间稍呈垂直地向上延长，形成分生孢子梗。 产酶种类： 糖化酶、α-淀粉酶、酸性蛋白酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶等 特征： 属于半知菌亚门,分生孢子梗基部无足细胞，孢子梗顶端不膨大成囊，而是多次分枝形成扫帚状，小梗末端形成分生孢子。 产酶种类： 葡萄糖氧化酶、果胶酶、纤维素酶等 5. 青霉 ①固体培养法：把菌种接人固体培养基中,保温数天,用水或缓冲液浸泡培养基,将酶抽提,测定酶活力,这种方法主要适用于霉菌. ②液体培养法：将菌种接人液体培养基后,静置或在摇床上振荡培养一段时间(视菌种而异),再测定培养物中酶的活力,通过比较,筛选 胞外酶： 保藏细胞 细胞活化 细胞扩大培养 发酵 分离纯化 酶 原生质体 培养基 固定化原生质体 固定化细胞 预培养 无菌空气 酶发酵生产的一般工艺流程 细胞活化：保藏细胞在使用之前必须接种于新鲜的斜面培养基上，在一定条件下进行培养，以恢复细胞的生命活力，这就叫细胞的活化。 种子培养基：用于细胞扩大培养的培养基。 氮源丰富 碳源少 温度、pH、溶解氧 接种量：1~10% 培养基：是指人工配制的用于细胞培养和发酵的各种营养物质的混合物。 碳源 氮源 无机盐 生长因素 1.细胞发酵产酶的最适pH与生长最适pH值往往不同，通常接近于该酶反应的最适pH。 2.有些细胞可以同时产生多种酶，通过控制培养基的pH，往往可以改变各种酶之间的产量比例。 3.培养基的pH在细胞生长繁殖和代谢物产生的过程中往往会发生变化。 1.细胞发酵产酶的最适温度与最适生长温度有所不同，而且往往低于最适生长温度。 2.有些酶的发酵生产，要在不同阶段控制不同的温度条件。 调节溶解氧的方法： （1）调节通气量 （2）调节氧的分压 （3）调节气液接触时间 （4）调节气液接触面积 （5）改变培养基的性质 1.固体培养发酵 优点：设备简单、操作方便、麸曲中酶浓度较高、适合霉菌培养发酵 缺点：劳动强度大、原料利用率低、生产周期长 2.液体深层发酵 3.固定化细胞 4.固定化原生质体