细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 , 细胞内DNA和RNA的原位显示.ppt

细胞生物学与遗传学教研室 第二次实验 Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示 [实验目的] 1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的分布情况； 2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的原理和方法。 [实验原理] 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理 甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。 [实验用品] 95%乙醇 三氯醋酸 甲基绿-派洛宁 0.1%酸性固绿 0.1%碱性固绿 [操作流程] 暴露 胸腔 氯仿麻醉 取心脏血 晾干 制 血涂片 固定 20min 洗涤 90 ℃ 三氯醋酸 95%乙醇，5-10min 2张 1张 (3张) 0.1%酸性固绿 5min 0.1%碱性固绿 45min 晾干 镜检 洗涤 晾 干 洗 涤 甲基绿-派洛宁 10min 染 色 洗涤 1 min 两人一组，每组制3张血涂片 其中只有2张血涂片需经过三氯醋酸处理（为什么？） [注意事项] [结果观察] 酸性蛋白 碱性蛋白 DNA和RNA的显示 请回答细胞化学法在本次实验中的应用。 通过本次实验学到哪些基本操作技能？ 请描述本次实验的显微观察结果。 [作业] 评价本次实验的得失 本次实验需要巩固的概念 细胞化学法 本次实验需要掌握的实验技能 1. 血涂片制作方法 2. 染色的规范操作方法 3. 洗涤方法（流水冲洗） 4. 正确的镜检方法（显微观察技术） [小结] 1. 完成实验报告； 2. 将动物尸体送到实验室门口动物尸体篓； 3. 清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊子等是否齐全）； 4. 做好显微镜使用登记，盖好防尘罩； 5. 将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中; 6. 盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。 （弃入水槽中会引起下水道堵塞） 镜检后作业与工作 值日生工作： 1、检查显微镜 2、清点检查器材 3、清洁公共实验区、打扫卫生 4、送交动物尸体 5、检查水电门窗安全 我们拿到这两个实验题目之后，会发现，今天的这两个实验我们都会用到原位显示中的，细胞化学法。大家仔细看一下，我们要进行原位显示的是细胞内的核酸以及蛋白质，这两类生物大分子，它们在细胞中的性质，以及分布。 我们拿到这两个实验题目之后，会发现，今天的这两个实验我们都会用到原位显示中的，细胞化学法。大家仔细看一下，我们要进行原位显示的是细胞内的核酸以及蛋白质，这两类生物大分子，它们在细胞中的性质，以及分布。