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大学生研究性学习和创新性实验计划项目 结题报告书 项目名称 复合菌群的固定化及其降酚特性 项目主持人 陈泽新 所在学校及院系 湘潭大学化工学院 项目级别 □国家级 □省级 校级 立项年份 2011年4月 指导老师 曾虹燕（教授） 填表日期 2012年3月4日 湘 潭 大 学 教 务 处 制  一、基本情况 项目名称 复合菌群的固定化及其降酚特性 立项时间 2011年 完成时间 2013年 项 目 主 要 研 究 人 员 序号 姓 名 学号 专业班级 所在院（系） 项目中的 分 工 1 陈泽新 2009651110 生物工程2班 化工学院 确定研究方向及其目标、后期总结及操作实验 2 陈婉 2009651106 生物工程2班 化工学院 过程探讨及操作实验 3 单建军 2009651115 生物工程2班 化工学院 搜集整理资料及操作实验 4 杨硕 2009651133 生物工程2班 化工学院 仪器研究使用及操作实验 5 伍春辉 2009651118 生物工程2班 化工学院 数据记录及操作实验 二、研究成果简介 项目成果类型 □产品 □系统软件 论文 □专利 □其它 （注：请在相应成果复选框内打“√”，其它请具体说明） 项目成果名称 已发表论文： 双金属Hg2+和Cu2+对木瓜蛋白酶活性与构象的影响，中南大学学报自然科学版（EI核心） 项目研究的目的及意义 本项目旨在提供一种用生物法处理含酚废水的方法，从活性污泥中驯化筛选出高效降酚菌种，构建高效复合菌群，深入研究其降酚特性，以提高复合菌群的环境适应性，并对其固定化做初步研究。在此过程中，针对废水中常见重金属离子污染物Hg2+和Cu2+，我们利用单一、低特异性的木瓜蛋白酶代替复杂的菌体蛋白酶，研究了Hg2+和Cu2+离子对蛋白酶活性与构象的影响。 一直困扰着煤气废水、焦化废水等的工业废水处理，是世界各国重点解决的有害废水之一。本项目驯化、筛选出了高效降酚菌群，揭示了其最佳生长条件，并利用木瓜蛋白酶进行废水中常见重金属离子Hg2+和Cu2+对蛋白酶活性与构象影响的研究，初步揭示了这两种重金属离子对菌体内相似。这些工作对用生物法去除废水中的酚类物质、改善水资源环境以及理解废水中重金属离子的毒性机理具有重要的理论意义和实践意义。研究和实验的主要内容 从获得活性污泥中，经驯化、筛选，获得复合降酚菌群，并分离鉴定主要菌种菌属。 针对复合菌群的降酚特性，确定其最佳生长条件。 以镁铁水滑石为载体，研究最佳镁铁比、水滑石投加量和固定时间，以及外界条件对固定化复合菌群降酚特性的影响。 在蛋白酶最佳反应条件下研究Hg2+、Cu2+和Hg2++Cu2+离子对其活性以及构象的影响。 项目的研究成果及结论 1. 根据《伯杰细菌鉴定手册》和《一般常用细菌鉴定手册》，结合生理生化实验，鉴定复合菌群中最主要两种菌种分别为黄杆菌属(Flavobacterium sp.)和醋酸杆菌属（Acetobacter sp.）。 2. 确定了复合菌群降酚的最佳实验条件是温度33℃，pH 6.06和接种量13%，此时苯酚的降解率和生物量分别是96.97% 和410.78 mg/L。 3. 以镁铁水滑石为载体，经过固定化实验研究发现，镁铁比为3:1，水滑石投加量为4g/L,固定化12 h时，制备的水滑石固定化载体的降酚活性最高；同时研究了外界条件对固定化复合菌群降解苯酚的影响，发现在30-37℃和pH 5.0-7.0时降酚率。 4. 研究Hg2+、Cu2+对酶活性的影响，确定了Hg2+和Cu2+浓度分别为10-6mol/L和10-9mol/L时，对酶的激活作用最强；Hg2+和Cu2+浓度均为10-4mol/L时，对酶的抑制作用最强。 5. 双金属离子对酶活性影响的实验结论表明，金属离子与木瓜蛋白酶活性之间存在剂量-效应关系，表现出低剂量促进，高剂量抑制的Hormesis现象。低浓度下，双金属Hg2+和Cu2+表现出协同激活效应；高浓度下，Cu2+的添加屏蔽了Hg2+的抑制作用。双金属离子浓度为10?6 mol/L Hg2+和10?8 mol/L Cu2+时，对酶的激活效应最大，其处理的木瓜蛋白酶的有序结构(α-螺旋+β-折叠)含量最高，二级结构最稳定，酶与底物亲和力最强，活性最高。当双金属离子浓度为10?4 mol/L Hg2+和10?4 mol/L Cu2+时，其抑制力最强，处理的木瓜蛋白酶有序结构含量最低，二级结构破坏，活性最低。木瓜蛋白酶分子构象的有序度与其活性呈正相关。 特色与创新之处 1. 2. 由于本项目中利用单一、低特异性的木瓜蛋白酶复合菌群中提取出的复杂的蛋白酶液来研究废水中重金属离子对酶的毒性