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青贮饲料中乳酸菌菌数检测方法.pdf
追本溯源，物华天宝；聚芯成泰，生生不息！
青贮饲料中乳酸菌菌数检测方法
1 设备及仪器
1.1 超净工作台。
1.2 恒温培养箱(可设定到 37℃)。
1.3 鼓风恒温干燥箱（烘箱）:烘干工具用，内部中心温度需达 170℃以上。
1.4 高压蒸汽灭菌锅:培养基及稀释液等材料及培养皿等用具等灭菌用，能 121℃灭菌 15 分钟。
1.5 冰箱:能保持 0℃至5℃,用于保存样品及灭菌培养基等，灭菌培养基保存不能超过 2 周。
1.6 封闭电炉或电磁炉及配套锅：用于熔解培养基。
1.7 试管振荡器：用于振荡摇匀样品溶液。
1.8 稀释瓶:硬质玻璃制造，螺旋盖密闭，能高压灭菌，可用 20ml 螺口刻度试管或 200ml 细口
牛奶稀释瓶。
1.9 培养皿(直径为 90mm)。
1.10 三角瓶:250ml、500ml。
1.11 天平（精确至 0.1g）
1.12 酒精灯。
1.13 试管架。
1.14 药匙。
1.15 200μL、1000μL 移液器及相应的吸头。
1.16 10ml 移液管及配套洗耳球。
1.17 玻璃珠（直径 5mm左右）。
2 培养基和试剂
2.1 MRS（Man Rogosa Sharpe）琼脂固体粉末培养基（成分组成见附表，直接购买成品培养基）。
2.2 75%医用酒精。
2.3 蒸馏水。
3 青贮饲料
3.1 取样：首先清除封盖物，并除去上层发霉的青贮料；再自上而下从不同层次中分点均匀取
样。采集的样品可立即进行质量评定，也可以置于塑料封口袋中密闭，4℃ 冰箱保存、待测。
如检测微生物，则采样器具和封口袋得灭菌处理。
3.2 待测溶液制备：称取新鲜的青贮饲料 25g，装入盛有 225mL0.85%灭菌生理盐水或蒸馏水的
三角瓶内，加少量玻璃株摇床震荡 30 分钟，制成待测溶液。
4 操作流程
根据待测样品中乳酸菌活菌含量的大致数量级，确定 3 个连续的适宜稀释浓度（每个数量
级浓度相差 10 倍）做平板培养计数，每个浓度设置 2 个培养皿重复。
4.1 实验用具准备（清洗、烘干、灭菌）
4.1.1 准备所需的螺口试管、培养皿、三角瓶（盛装培养基用）、200μL 吸头、1000μL 吸头、
玻璃珠等用具，先用自来水清洗干净，再用蒸馏水或纯净水润洗一遍，晾干或烘干备用。
4.1.2 培养皿和装满枪头的枪头盒分别用报纸包扎严实、玻璃珠放入试管拧上盖子（拧紧后稍
松半圈），放入灭菌锅 121℃灭菌15分钟。
4.1.3 待灭菌完成后（切记必须等压力表指针指向 0 帕后才可小心打开灭菌锅盖，开口不能冲
着人）将上述用具取出后放入烘箱烘干，然后放入超净工作台备用。
4.2 稀释液和培养基制备
台湾亚芯生物科技有限公司
地址：北京市海淀区西钓鱼台嘉园 1-B-109 室 电话：010 邮箱：yaxin@.tw
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4.2.1 用10ml移液管将螺口试管中各装入9ml蒸馏水即成稀释液，拧上盖子（拧紧后稍松半圈）。
4.2.2 在三角瓶加入所需的蒸馏水和固体 MRS培养基（每个三角瓶中液体量不超过 150ml），
搅拌均匀后盖上封口膜放入沸水中溶解。
4.2.3 将稀释液和培养基放入灭菌锅 121℃灭菌 15 分钟。待冷却至 50-60℃时（不烫手，呈透
明状）取出，放入超净工作台。
4.2.4 将呈透明状的液体培养基（约 55℃）倾倒至培养皿，每皿约 15ml，摇匀后稍开点盖缝隙，
待冷却凝固后用油性 Marker 笔在培养皿上标示组别、编号、日期，与所使用的稀释倍数菌液，
备用。
4.3 样品液的浓度梯度稀释
4.3.1 取3.2制备好的待测溶液 1ml，置于装有 9mL 灭菌稀释液的螺口试管中，拧盖后振荡试管
约
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