基于baf／gm细胞株法检测生长激素生物活性研究 - 中国全科医学.pdf

　 　　　　　　　　　　　　　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗｃｈｉｎａｇｐｎｅｔ　Ｅｍａｉｌ：ｚｇｑｋｙｘ＠ｃｈｉｎａｇｐｎｅｔｃｎ ·３５６７· ·论著 · 基于ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法检测生长激素生物活性研究 罗燕飞，热衣兰木 ·包尔汉，米热古丽 ·买买提，李 静，史兆龙 　　 【摘要】　目的　 探讨基于ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法检测生长激素 （ＧＨ）生物活性的可行性，为临床检测 ＧＨ生物活 性提供参考方法。方法　选取２０１１年７月—２０１３年 １２月新疆医科大学第一附属医院儿科收治的特发性身材矮小 （ＩＳＳ）患儿４２例 （ＩＳＳ组），另选取同期本院预防保健科体检健康儿童５２例 （对照组）。建立ＢＡＦ／ＧＭ细胞株，常规 培养于ＤＭＥＭ高糖培养基。培养液洗涤后转移到含１０％马血清的培养基中培养１６ｈ。采用含１０％马血清的培养基重悬 ５ 细胞，调整细胞浓度为３×１０个／ｍｌ，混匀后取１００ ｌ滴在９６孔板中。稀释标准ＧＨ溶液至终浓度为００１～１０００００ μ ｇ／Ｌ，取１０ ｌ标准ＧＨ溶液滴加到９６孔板中，培养２２ｈ。每孔加入２２ ｌ反应液，继续培养３ｈ，在４９０ｎｍ处测定吸 μ μ μ 光度 （ＯＤ）值。绘制ＯＤ值与 ＧＨ生物活性当量关系的标准曲线。采用含 １０％马血清的培养基配制促甲状腺激素 （１００ｍＵ／Ｌ）、黄体生成素 （１００００Ｕ／Ｌ）、卵泡刺激素 （１００００Ｕ／Ｌ）、催乳素 （１００Ｕ／Ｌ）、成纤维细胞生长因子 （１０００ ｇ／Ｌ）、表皮生长因子 （１００ ｇ／Ｌ）、人类胰岛素样生长因子 １（ＩＧＦ１，１０ ｇ／Ｌ）、氢化可的松 （１００ ｇ／Ｌ）、 μ μ μ μ 诺和灵Ｒ（１０Ｕ／Ｌ）、Ｌ－甲状腺素钠 （６４３５ｎｍｏｌ／Ｌ），同时每孔加标准ＧＨ溶液５ ｌ（２０ ｇ／Ｌ）进行干扰实验。采 μ μ 集两组受试者空腹静脉血，采用放射免疫分析法 （ＩＲＭＡ）测定血清ＧＨ水平；灭活血清标本，以ＭＴＳ法测定４９０ｎｍ 处ＯＤ值，代入标准曲线计算血清ＧＨ生物学活性当量。结果　ＧＨ生物活性当量与ＯＤ值关系的标准曲线为Ｙ＝０８５２ ２ ０ｌｎ（Ｘ）＋０４９８８，Ｒ ＝０９６９８，其中Ｘ为ＧＨ生物活性当量，Ｙ为ＯＤ值。加入促甲状腺激素、黄体生成素、卵泡 刺激素、催乳素、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、ＩＧＦ１、氢化可的松、诺和灵 Ｒ和Ｌ－甲状腺素钠后测得 ＯＤ 值分别与标准ＧＨ溶液比较，差异均无统计学意义 （Ｐ＞００５）。两组受试者 ＧＨ水平比较，差异无统计学意义 （Ｐ＞ ００５）。ＩＳＳ组ＧＨ生物活性当量、ＧＨ生物活性低于对照组，差异均有统计学意义 （Ｐ＜００５）。结论　基于ＢＡＦ／ＧＭ 细胞株法是潜在的检测ＧＨ生物活性的良好方法，且具有一定的抗干扰能力。 　　 【关键词】　生长激素；生物活性；ＢＡＦ／ＧＭ细胞株；特发性身材矮小 　　 【中图分类号】Ｒ３４７５１１　 【文献标识码】Ａ　ＤＯＩ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００７－９５７２２０１６２９０１２ 　　 罗燕飞，热衣兰木 ·包尔汉，米热古丽 ·买买提，等．基于 ＢＡＦ／ＧＭ细胞株法检测生长激素生物活性研究． ［Ｊ］．中国全科医学，２０１６，１９（２９）：３５６７－３５７０．［ｗｗｗｃｈｉｎａｇｐｎｅｔ］ 　　 ＬＵＯＹＦ，ＲＥＹＩＬＡＮＭＵ·Ｂａｏｅｒｈａｎ，ＭＩＲＥＧＵＬＩ·Ｍａｉｍａｉｔｉ，ｅｔａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅｂａｓｅｄｏｎ ＢＡＦ／ＧＭｃｅｌｌｌｉｎｅ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＧｅｎｅｒａｌＰｒａｃｔｉｃｅ，２０１６，１９（２９）：３５６７－３５７０． ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅＢａｓｅｄｏｎＢＡＦ／ＧＭ ＣｅｌｌＬｉｎｅ