诱导性多能干细胞正常小鼠耳蜗内移植的实验研究.pdfVIP

摘要 摘 要 研究目的： 利用显微注射的方法将诱导性多能干细胞（iPSCs ）移植至正常小鼠耳蜗内， 观察其分化转归情况，为iPSCs 的耳聋治疗提供一定的理论依据和试验基础。 研究方法： 1. 建立稳定的小鼠iPSCs 的培养体系，对稳定传代的小鼠iPSCs 进行体外 鉴定。 2.小鼠iPSCs 细胞的标记和移植：用CM-Dil 染料标记iPSCs，流式细胞仪 鉴定标记效率。20 只正常6-8 周龄SPF 级CD-1/ICR 鼠随机平均分为A 、B 两组： A 组为试验组，B 组为对照组，将左耳定为试验耳，实验组移植CM-Dil 标记的 iPSCs ，对照组移植等体积的 DMEM 基础培养基。两组均在术前 1 周和术后 1 月对小鼠左耳行听性脑干反应（ABR ）的检测。 3.miPSCs 耳蜗移植后分化细胞的鉴定：细胞移植 1 月后免疫组织荧光染色 鉴定移植后的细胞是否表达毛细胞标志物（Myosin Ⅶa、Espin ）和神经元细胞 标志物（Nestin 、Neurofilament-M ）。 4.miPSCs 耳蜗内移植后用HE 染色鉴定是否有畸胎瘤形成。 结果： 1.成功建立了稳定的小鼠iPSCs 培养体系。稳定传代的小鼠iPSCs 经AP 染 色鉴定阳性且可形成EBs 。 2.荧光染料（CM-Dil ）对小鼠iPS 细胞的标记效率达到96.42% 。术前1 周， A 组、B 组ABR 反应阈分别为24.50±5.50dB SPL、26.00±6.15 dB SPL ；A 、B 两组术前1 周的ABR 反应阈比较差异无统计学意义(p=0.572 ＞0.05) 。术后1 月， A 组、B 组ABR 反应阈分别为70.50±4.97dB SPL、68.00±5.37 dB SPL；A 、B 两组术后1 月的ABR 反应阈比较差异无统计学意义(p=0.295 ＞0.05) 。A 、B 两组 ABR 反应阈术后均较术前高（p 值均＜0.05)，差异有统计学意义。 3.A 组小鼠耳蜗的内外淋巴内及蜗轴内均可见 CM-Dil 标记的小鼠 iPSCs ， 并且部分红色荧光标记的细胞表达毛细胞标志物（Myosin Ⅶa、Espin ）和神经 元细胞标志物（Nestin 、Neurofilament-M ）。B 组耳蜗内未见有红色荧光表达。 4.HE 染色鉴定移植miPSCs 后耳蜗内可见畸胎瘤形成。 II 万方数据 摘要 结论： 1. 耳蜗内移植后的小鼠iPSCs 可以分化为表达毛细胞标志物的细胞； 2. 耳蜗内移植后的小鼠iPSCs 可以分化为表达神经元标志物的细胞； 2. 小鼠iPSCs 耳蜗内移植后有形成畸胎瘤的可能； 4. 经圆窗径路耳蜗移植iPSCs 短期内不能改善因为损伤导致的小鼠听力下 降。 关键词：诱导性多能干细胞；内耳移植；毛细胞；螺旋神经元；听性脑干诱发 电位 ☆国家自然科学基金资助项目：（NO.8116016） III 万方数据 Abstract ABSTRACT